军团菌是一种能够感染多种动物的病原菌，其中豚鼠对其极为敏感，能够引发致死性军团菌肺炎，症状与人类感染后的表现相近。虽然豚鼠模型在评估军团菌毒力和抗生素效果方面具有重要价值，但由于缺乏商业化的豚鼠试剂，限制了其应用。因此，常见的小鼠模型，尤其是A/J小鼠，成为了评估军团菌抗性和潜在疗效的主要方法。

一、动物选择和细菌培养

为了进行军团菌小鼠模型的研究，我们选用SPF级雌性6～8周龄的A/J小鼠，并在23℃恒温、12h明暗交替照明的独立鼠笼中饲养。军团菌能在BCYE培养基上生长，并连续传3代后取菌落，溶于PBS中测定OD600值，为动物感染接种作准备。

二、感染途径

小鼠穿刺麻醉后，我们通过腹腔注射氯胺酮并固定小鼠。接着，我们在小鼠颈部的腹侧切口处分离出气管，并使用无菌注射器注入100～10的8次方个军团菌。最后，我们使用无菌创口夹固定并关闭创口，并在对照组注入PBS。

三、样品采集

小鼠安乐死后，我们采集血液和尿样，并无菌取出肺和肝等脏器。其中，一部分用于病理检测，放入10％福尔马林中固定。另一部分加入3ml无菌PBS中研磨脏器组织，并取10ul组织匀浆液，经过1：10的连续稀释后，接种于BCYE琼脂平板。样品保存于-80℃。

四、感染军团菌小鼠模型的特点

在小鼠感染军团菌的24小时内，肺内菌落数量达到最高峰。将血清1型L.longbeachae菌D4968以100 000cfu的剂量接种至小鼠气管内后2小时，最早发现的病变是细支气管柱状上皮。顶部的上皮细胞变为圆形并变小，部分上皮细胞失去了其假横纹的形态。此外，细支气管基底膜的肌层变薄变长，而细支气管肌层、细支气管周围和管腔内没有炎性渗出物。在感染后的72小时内，柱状上皮细胞减少，转化为柱状基底上皮细胞。黏膜肌层的平滑肌增厚，有多形核细胞和单核细胞浸润，并出现坏死变性。细支气管周和邻近的肺泡间质区有大量的中性粒细胞浸润，但肺泡囊内和细支气管远端的肺间质无炎性细胞浸润。炎性细胞仅局限于细支气管周围，形成局灶性浸润。细支气管腔内有中性粒细胞浸润，血管壁和内膜增厚，并有炎性细胞浸润。尽管小鼠接受的是致死剂量100 000cfu的活菌攻击，但由于两者病变进程相近，因此肺感染晚期病变须在感染1000cfu的活菌的小鼠中观察，感染后3～7天，细支气管周围有局灶性炎性细胞浸润，伴有基底膜受损。肺实质病变恢复一般需要感染后14～21天，这与小鼠体内抑制肺内L.longbeachae生长的能力有关。

北检院部分仪器展示