李斯特菌小鼠感染模型制作
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李斯特菌感染的动物模型对研究该病毒的生命周期、传播途径、免疫机制等具有重要意义。不过由于技术上的限制,能够感染李斯特菌的动物并不常见,其中绵羊、山羊和牛等农场动物属于传统实验动物。
小鼠不是李斯特菌最理想的动物模型,因为它们对许多人源性李斯特菌的感染并不敏感,并且感染后其急性症状与人感染后不同。但由于其操作方便,并且目前并没有更好的替代模型,小鼠仍然是李斯特菌最常见的动物模型。
1.实验动物实验中所使用的实验动物,包括BALB/c鼠、A/J小鼠、C57BL/6,TCR-TG(BALB/c背景)鼠 DO11.10(TCR基因为Vβ812品系),均为雌性,6~8周龄。
2.细菌培养基实验中所使用的细菌培养基为100ml,其中含蛋白胨2g,NaCl 0.5g,葡萄糖0.25g,K2HPO4 0.25g,pH 7.3。
3.病原菌制备及实验动物感染在实验前,需要用接种针取少许4℃保存的李斯特菌株,然后接种于5ml培养基中,经过37℃,摇床培养5小时后,使用紫外分光光度计测量波长为290nm的OD值,这时可根据计算方法得出菌浓度。使用1×1000个李斯特菌溶于0.2ml生理盐水,进行腹腔注射。感染BALB/c小鼠后,可进行相应的对照,以观察其存活率。
也可以采用静脉注射、鼻内注射和经口腔给菌等方法进行感染,但是其中口腔给菌方法的效果不佳,因为通过小肠屏障的李斯特菌很少。
4.小鼠李斯特菌模型的指标和结果在研究中发现,小鼠经胃填饲的方式对李斯特菌易感,但C57BL/6小鼠经胃途径对李斯特不易感。因此,目前越来越多的研究采用经胃途径感染李斯特菌。在感染后的72小时内,李斯特菌更容易穿过A/J小鼠的肠胃到达盲肠、肝和脾,而A/J小鼠感染后脾脏生发中心被破坏,并有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润;肝内有灶状坏死,并有大量中性粒细胞和巨噬细胞浸润。相比之下,C57BL/6小鼠肝脾无病变。
综上所述,小鼠模型是当前最常用的李斯特菌感染动物模型,本文介绍了常见的小鼠李斯特菌模型的指标和方法。
北检院部分仪器展示