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肠出血性大肠杆菌兔感染模型

首页 > 业务领域 > 其他分析测试 浏览: 发布日期:2023-05-18 17:44:44

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离乳兔对EHEC并非易感,故常采用几日龄(以3日龄居多)的乳兔模型用于研究。通过使用3~10日龄的幼兔构建EHEC感染模型,第一次在动物模型中观察到EHEC感染引起的腹泻症状。

(1)感染方法: Ritchie等人的研究表明,在新西兰大耳白2日龄的幼兔中,每窝随母兔分别饲养,到达3日龄时可采用灌胃的方式进行EHEC病菌感染。

(2)感染剂量: 采用接种浓度为每90克动物体重5×10的8次方cfu的EHEC病菌,感染当日先进行菌落计数,离心后使用经消毒的PBS(pH7.2)将活菌重悬,调整至10的9次方cfu/ml。

(3)实验结果: 感染后2~3天,幼兔会出现腹泻症状,肛门充血隆起,会阴部被液态粪便污染。使用潜血检测试纸对粪便进行检测,未发现潜血。尽管出现了严重的腹泻,但所有兔子的体重并未下降,反而随着实验的进行逐渐增加,且实验进行到第七天时,体重为实验前的两倍。即使将实验周期延长至14天或将插菌浓度提高至10的10次方cfu/ml,实验样品中未出现任何动物死亡的情况。在感染后2天解剖取材,尸检结果显示感染EHEC的兔子的盲肠和结肠呈膨胀状,并充满不成形的粪便和液体。经口服接种的EHEC移居至所有的远端小肠和大肠,感染第七天时,自幼兔的盲肠、回肠和中结肠组织中检出的细菌总数已达到每克组织10的8次方cfu。此外,粪便中的细菌数目最高,超过了每克粪便10的9次方cfu。尽管EHEC感染的兔子与PBS处理的对照组兔子同笼饲养,但EHEC感染对照组中均未出现交叉感染的情况。

EHEC感染的兔子肠道病变主要出现在结肠。临床表现包括化脓性结肠炎、血管充血等,主要集中在中结肠和远端结肠。与对照组动物相比,EHEC感染动物的中结肠和远端结肠内的嗜异染细胞(与兔子嗜中性粒细胞相似)和单核细胞数量明显增多,表现出明显的水肿充血。炎细胞主要聚集在黏膜表面的上皮细胞和黏膜固有层,有些延伸到黏膜下层。

通过透射电镜的观察发现,EHEC感染的兔子在感染后第三天出现A/E效应并有EHEC黏附在结肠黏膜上,导致微绒毛消失。EHEC感染亦可诱导幼兔消化道黏膜上皮细胞的凋亡、隐窝扩张、中性粒细胞浸润以及黏蛋白的消耗。目前认为,最主要的病理变化是由于Stx的作用产生的,因为使用纯化的Stx灌胃实验可以产生相同的病理改变。事实上,通过幼兔的感染模型还发现eae和tir对于细菌定植和迁移是必需的。然而,幼兔模型的缺点在于不能模拟出微血管病或是HUS,这可能是由于16日龄之前的幼兔不表达Stx受体Gb3。最后,该研究并未在兔子的肾组织和脑组织中观察到组织学异常。

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