一、实验目的

树鼩是一种灵巧、敏捷的低等灵长类动物，与人类的相似度较高。为了研究脑损伤的机制，本实验旨在利用自制的自由落体损伤装置建立一种创伤性脑损伤动物模型及行为学评价体系。

二、实验原理

该实验利用直接外力对树鼩大脑皮质进行撞击，以建立脑损伤模型。

三、实验材料与方法

(一)实验材料

1. 所需设备：全自动消毒锅(MLS-3020)，电热恒温鼓风干燥箱。

2. 所需试剂：水合氯醛粉，0.9％氯化钠溶液，医用碘伏消毒液。

3. 试剂配制：3.6％水合氯醛溶液：取3.6g的水合氯醛粉溶解于100ml灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混匀即可。室温保存。

4. 实验动物：雄性树鼩，体重为(110±10)g。

(二)实验具体方法和操作步骤

1. 制备TSI模型

(1) 麻醉：以3.6％水合氯醛腹腔注射(1ml/100g)进行麻醉。

(2) 备皮：麻醉起效后使用电动剃毛刀剪除树鼩头部毛发。

(3) 消毒铺巾：采用医用碘伏消毒液对头部皮肤进行常规消毒，随后铺设无菌洞巾。

(4) 暴露创口：沿矢状线切开头皮，暴露左侧顶骨，刮除骨膜，可以看到十字形前囟和人字缝。在矢状线左侧头部开1mm的窗口，以前后囟连线的中点为中心，使用牙科钻凿开一个直径为5mm的骨窗。（需要注意避免损伤硬脑膜），棉球可以止血。

(5) 损伤：使用自由落体撞击伤方法，采用50g的撞击锤，从30cm的高度自由坠落，冲击撞击杆造成脑损伤。撞杆底端与树鼩大脑接触面为一个直径4mm的球面。首先将树鼩放置于自由落体损伤装置底板上，树鼩头部面向自由落体损伤器，尾部面向操作者正前方。操作者使用食指和拇指捏住树鼩头部两侧，将其固定于撞击杆正下方。将每次使用前的撞杆使用医用碘伏消毒液进行消毒，然后将撞杆的底端放置于树鼩左侧头顶颅骨开窗处。50g的锤子从30cm的高度自由坠落，冲击撞击杆，撞击后立即移除撞杆。

(6) 关闭切口：从撞杆移除后，再次使用医用碘伏消毒液消毒切口，并将头皮进行缝合处理。

(7) 术后护理：术后将树鼩放回笼子，置于暖箱旁保暖。每只树鼩每天腹腔注射氨苄西林(剂量20IU)预防感染，持续3d。

2. 行为学评价：目前尚缺乏可靠的用于评价树鼩神经功能缺损的客观指标。然而，在实验中，我们观察到，在树鼩左侧大脑皮质损伤后，其行动表现会变得迟缓，右侧爪子的攀爬能力也会减弱，行走时双侧肢体会缺乏协调能力。损伤后11天，行动能力已有所恢复，右侧爪子的攀爬能力基本恢复到了左侧的水平，但是行走时双侧肢体协调仍然未能完全恢复到正常水平。

(三)实验操作中的注意事项

(1) 树鼩活动敏捷，善于奔跑和跳跃，麻醉时需要将其放入网兜中以有效防止其逃脱。

(2) 树鼩对3.6％水合氯醛腹腔注射(1ml/100g)较为敏感，注射后1～2min即可起效，呼吸减缓，四肢松弛。因此，建议在临近手术前5min再进行麻醉，以达到更好的麻醉效果。

四、获得的实验结果

(1) 损伤后没有一例动物死亡。因此，术后存活率很高。

(2) 损伤后，树鼩行动迟缓，并减轻了对侧爪子的攀爬能力。在行走过程中，双侧肢体缺乏协调能力。

五、结果分析

(1) 本方法可用于制备大脑皮质损伤模型，撞击后可看到大脑皮质被压陷或挫裂伤。

(2) 每只树鼩的行为学表现均不同，因此尚缺乏可用于特定神经功能缺失的可衡量具体指标。

六、经验与体会

在实验中，发现树鼩对3.6％水合氯醛腹腔注射(1ml/100g)特别敏感，因此如果在临手术前5min再进行麻醉处理，麻醉效果会更好。在开骨窗的过程中，要小心操作，以避免损伤矢状窦导致过多出血。

北检院部分仪器展示