一、实验目的

本实验旨在以SD大鼠为实验动物，采用自制的自由落体损伤装置建立一种标准化及可重复性优良的创伤性脑损伤(TBI)动物模型及行为学评价体系，为深入研究脑挫裂伤机制提供基础。

二、实验原理

本实验采用直接外力撞击SD大鼠大脑皮质造成脑损伤的方法。

三、实验材料与方法

     (一) 实验材料

1. 所需设备：全自动消毒锅（MLS-3020）；电热恒温鼓风干燥箱

2. 所需试剂：水合氯醛粉、0.9％氯化钠溶液、医用碘伏消毒液

3. 试剂配制：3.6％水合氯醛溶液，称取3.6克的水合氯醛粉溶解于100毫升灭菌的0.9％氯化钠溶液中混匀即可，室温下保存。

4. 实验动物：SD雄性大鼠，体重为(160±10)克

     (二) 实验具体方法和操作步骤

1. TBI模型制备

（1）麻醉：使用3.6％的水合氯醛（1毫升/100克体重）进行腹腔注射麻醉。

（2）备皮：麻醉后用电动剃毛刀剃除SD大鼠头顶部的毛发。

（3）消毒铺巾：医用碘伏消毒液常规消毒头部皮肤，覆盖无菌孔巾。

（4）暴露创口：沿矢状缝用手术刀切开头皮，暴露左侧顶骨、刮除骨膜，清晰暴露十字形前囟和人字形后囟及矢状缝，在矢状缝左旁1毫米处，以前后囟连线的中点为中心，用牙科钻凿开直径为5毫米的骨窗(避免损伤硬脑膜)，棉球止血。

（5）损伤：采用自由落体撞击伤方法制备创伤性脑外伤的SD大鼠模型，撞击锤质量为50克，打击高度为30厘米，撞击杆底端与SD大鼠大脑接触面为一个直径为4毫米的球面。将SD大鼠放置于自由落体损伤装置底板上，大鼠头部面向自由落体损伤装置，尾部面向操作者正前方。食指和拇指固定SD大鼠头部两侧，摆放在撞击杆正下方，撞击杆(每次撞击前用医用碘伏消毒液消毒撞击杆)底端置于大鼠左侧头顶颅骨开窗处，50克的撞击锤自30厘米高处自由坠落，撞击撞杆造成脑损伤，打击后立即移除撞击杆。

（6）关闭切口：移除撞击杆后再次使用医用碘伏消毒液消毒切口，然后缝合头皮。

（7）术后护理：术后将SD大鼠置于暖箱旁，保持体温在37℃左右，待SD大鼠完全苏醒后，放回饲养笼中。每只SD大鼠每天腹腔注射氨苄西林(剂量20IU)预防感染，持续3天。

2. 行为学评价：采用NSS(神经功能损伤严重程度评分)标准(18分制)分别于TBI模型制备后的第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天对SD大鼠进行行为学评分，分值越大，损伤越重(表10-1)。

（三）实验操作中的注意事项：

（1）在麻醉时，注射器针头要从一侧后肢内侧倾斜45°角向内上方(头端)刺入腹腔，可以感觉到明显的落空感。注射完毕后留针1分钟再迅速拔除针头，以避免麻醉效果不佳。

（2）开骨窗时一定要小心、细心操作牙科钻，以避免损伤矢状窦，引起大出血导致SD大鼠出血性休克，进而增加死亡率。如果不小心损伤矢状窦引起出血，立即停止操作，棉球压迫颅骨创口5～10分钟，止血后再继续操作。

北检院部分仪器展示