1.病毒及攻毒

在世界范围内，病毒的威胁日益增加。其中，Zaire亚型毒株是一种常见的病毒，攻毒剂量为100 LD50，皮下注射。

2.实验动物

为了研究病毒对动物的影响，我们选择了绿猴作为实验动物。

3.实验环境

为了保证病毒实验的安全性，我们在BSL-4级实验室进行实验。

4.实验步骤

我们每天都会观察动物的一般状况，包括眼、鼻、口、脸、耳、爪、四肢、肛门、尾、被毛、活动和精神状况。攻毒后每天称重1次，攻毒后2～8d每天安乐相同数量的绿猴(3只左右)。我们取血及如下组织：淋巴结(包括下颚、腋下、肠系膜、腹股沟及胭窝)、纵隔膜、脾、肝、肺、心、脑、肾、舌、胃、食管、气管、小肠、盲肠、结肠、膀胱、生殖系统、扁桃体、唾液腺、胸腺、胰腺、甲状腺、肾上腺及骨髓。同时设立未攻毒绿猴对照。

5.病毒分离

我们进行解剖后取如上组织，研磨处理后接种Vero细胞，每天观察细胞病变。

6.病毒RNA的检测

我们取如上组织放入1ml裂解液(Qiagen)中，用研磨器充分研磨，离心后取上清放入buffer RLT(已加入1％巯基乙醇)350μl，4℃，13000转/分离心3min, 将上清转移至新1.5ml微量离心管中。提取样品病毒核酸, 再将RNA反转录成cDNA，通过荧光定量PCR仪直接测定病毒核酸载量。

7.病毒抗体检测

我们在动物不同时间点处死采血分离血清，－80℃下保存备用，用特异性ELISA试剂盒对抗体进行检测。

8.病理观察

在解剖时取如上组织，详细观察各组织的形态变化，并将各组织用10％甲醛固定，石蜡包埋，常规病理组织切片处理后，HE方法染色后，镜检观察。

9.研究结果

我们在攻毒后的实验中发现，绿猴濒死前会出现体温的骤然下降，体重的减轻程度也会高于10％，推测是由于脱水，而非脂肪的分解，部分动物还会出现腹泻及间歇性黑粪症的现象。攻毒后4 d时，绿猴皮肤上通常会出现斑丘疹并持续至死亡。发病早期会出现外周淋巴结肿大，中期及晚期可见肝脏肿大并出现圆形囊状边缘。病毒血症通常于攻毒后2d可以被检测出来，并于2～3d后达到峰值(图14-15和图14-16)。同时，所有被攻毒的绿猴均出现显著的血小板减少的症状，从攻毒后6d开始出现凝血时间延长的现象，至10～12d时血液失去凝集能力。此外，血浆中的钠、钾、钙离子水平均呈下降趋势，而尿素和肌酸酐水平上升。从第5天开始，转氨酶(AST，ALT)水平持续升高，直至动物死亡。

北检院部分仪器展示