一、实验目的

本实验的目的是制备小鼠脊髓挫伤模型，并探究其脊髓受损后在行为学和形态学方面的变化，为后续研究损伤后的修复策略及生物分子机制提供有效的参考。

二、实验原理

以Allen建立的重物坠落致脊髓损伤的方法为基础，本实验针对小鼠建立了脊髓挫伤模型。这种模型具有较高的相似性，更加接近人类脊髓损伤的病理生理特点及变化规律，因此可为人类脊髓损伤的行为学和形态学变化提供较好的基础。

三、实验材料与方法

(一)实验材料

1.所需设备: 重物坠落打击仪(自制)；电热压力蒸汽灭菌器；微量电子天平；电热恒温鼓风干燥箱；水平电泳仪；电热蒸馏水器；20μl、100μl、200μl、1000μl可调微量加样枪；手术器械：眼科剪、解剖剪、蚊式钳、有齿镊、无齿镊。

2.所需试剂: 3.6％水合氯醛，75％乙醇，碘伏，8U/ml青霉素钠，生理盐水，葡萄糖溶液。

3.试剂配制: 3.6％水合氯醛溶液：称取0.36g的水合氯醛溶于10ml的蒸馏水中，混匀，现配现用。

(二)实验方法

1.小鼠脊髓挫伤模型制备

(1)实验动物及饲养环境：

本实验采用C57BL/6J小鼠，雌性，2～3月龄，体重为(25±5)g。实验动物在18～19℃的室温下饲养，相对湿度为40％～70％，每小时换气10～20次，噪声在60dB以下，每立方米空气中氨在14mg以下，工作照度为150～300lx。需要每天喂料、喂水，垫料每周更换2～3次，造模损伤后，要分笼饲喂。

(2)脊髓损伤：

首先，消毒右下腹部毛发，然后在腹股沟中点上方0.5cm处进针，注入一定量(1ml/100g)的3.6％水合氯醛，使小鼠麻醉。在麻醉过程中，需要注意保温，同时助手必须详细记录每只小鼠的手术开始和结束时间，以及估计失血量，以便术后治疗及护理。

3至5分钟后，小鼠出现站立不稳的情况，疼痛反应变弱或消失。将小鼠置于俯卧位上固定，常规进行备皮和消毒，然后逐层分离筋膜及肌肉，暴露出T8～T10(第6～8胸椎)节段脊椎棘突。接着，使用钝性手术器械分离T8～T10节段脊椎上的肌肉，并使用咬骨钳将T8～T10节段棘突及椎板去除，从而暴露出T10脊髓。之后，使用一根2.5g的金属棒在30mm处自由下落，打击T10神经节段。注意：打击前需要对金属棒进行消毒处理，并在打击后对脊髓损伤区进行清洗处理。脊髓损伤成功以鼠尾摆动和后肢回缩性扑动为标志。

术后处理：需要将动物分笼饲养，让其暴露在自然光照和通风的环境下，并不断更换干燥的饲养笼垫料以保持其干燥。如出现肢体被尿液浸湿的情况，需要及时用温肥皂水清洗，并用电吹风吹干。同时，需要加强营养，喂食鸡蛋、葵花籽，并将饲料和饮水置于动物可及范围内。饲养期间需要注意观察动物精神状态

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北检院部分仪器展示