亚急性衰老动物模型建立方法
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所谓亚急性衰老模型,是指通过连续给动物注射D-半乳糖,导致机体细胞内半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶的催化下,半乳糖被还原成半乳糖醇并且不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内,影响正常渗透压,进而导致细胞肿胀、功能障碍、代谢紊乱,破坏并消耗机体抗氧化防御系统,使自由基积聚。这种模型在一定程度上模拟了自然衰老过程,在对机体的研究有着很重要的意义。
下面介绍该模型的具体操作步骤:
首先,取健康雌性小鼠,一般采用普通饲料常规喂养的方法。然后将模型组小鼠每天颈背部皮下注射D-半乳糖(0.25ml/10g),连续注射6~8周。在注射结束后,小鼠行动会变得迟缓,毛色也会变得灰暗,形体瘦弱,明显表现出衰老体征。
此时,我们需要进行学习记忆训练实验,一般采用避暗实验(step through test),该实验通过反射箱分单独5个箱,每个箱大小为36cm×12cm×12cm ,其中明暗两室之间有一个直径为3cm的洞口,通过连线与微机连接,由微机控制记录动物从明室通过洞口进入暗室的潜伏期。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室,同时开始计时,小鼠穿过洞口进入暗室受到电击,计时自动停止。取出小鼠,记录小鼠从明室入暗室的潜伏期和5min内的电击次数,此为训练成绩。隔24小时后再测以获得测试成绩。
最后,我们需要测定一些衰老指标,主要包括体重、脏器指数和抗氧化指标等等。其中,脏器指数的计算公式为:脏器重量/体重×100%。
值得注意的是,选择雌性小鼠进行实验,保持无菌操作,并定时更换鼠笼垫料和饮水壶,保持清洁。由于给药时间较长,机体逐渐老化,功能状态也会逐渐变差,因此实验过程需要谨慎进行。
北检院部分仪器展示