甲型肝炎病毒树鼩模型
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【操作步骤】首先需要取得甲肝病人甲肝抗原阳性的大便样本,将其制成5%的悬液,在3000及8000转/分的离心过程中各离心30分钟,然后将上清液冻存于-80℃备用。接下来,我们可以在ABSL-3实验室内,给成年健康的树鼩口服0.5ml的5%甲肝病人甲肝抗原阳性新鲜大便悬液。感染后,如果持续排毒15~21天,那么滴度为1:10~1:320,排毒会在30天后停止。接着,我们将使用第一代感染树鼩甲肝抗原阳性粪便的10%悬液,给每只正常树鼩口服1ml来进行第二代感染。感染后,约1周之后仍能在其粪便中查到抗原,排毒持续12~27天,其高峰在7~13天;我们可以将第二代感染动物排毒高峰期的粪便制成10%悬液,再次使用同样的方法进行第三代感染,后者粪便中也能查到抗原。
【结果分析】(1)实验结果表明,甲肝病毒可以在树鼩的体内繁殖,感染后7~13天开始从粪便排毒,持续15~21天。随着病毒在树鼩体内传代,潜伏期似乎有所缩短,感染率也趋向增高,然而,大多数动物为非临床型,第一代感染动物仅个别有一过性的血清谷丙转氨酶(SGPT)升高,这可能与病毒的适应性有关。(2)感染后2~16周,有78%的动物血清中出现甲肝病毒抗体,然而滴度较低,有的很快就不能再次检测到。对照组的动物,服用正常人大便滤液前后,持续测出较高滴度的甲肝病毒抗体,这可能是自然感染所致,因为树鼩有吃人粪便的习惯。(3)通过固相放射免疫阻抑试验和免疫电镜观察病毒颗粒的大小、形状和免疫学性质,结果表明从感染树鼩粪便中提取的抗原与人的甲肝病毒相似。(4)感染树鼩尸检发现其肝脏充血、水肿及实质变性,但与其他用甲肝病毒感染动物相比,如狨猴、黑猩猩和红面猴,树鼩的肝脏病变较轻,没有出现典型的急性肝炎改变,这可能与病毒的感染量、毒力及其在树鼩体内的繁殖程度有关。
北检院部分仪器展示