【操作步骤】芙蓉鸭幼鸭出壳24小时内采取自胫静脉采血并分离血清，然后通过斑点酶免疫分析(DotEIA)法检测鸭乙型肝炎病毒(DHBV)表面及前表面抗原(DHBs/presAg)，并通过DNA斑点杂交检测DHBV DNA，以此筛选DHBV两者均为阴性的幼鸭进行实验。接着分别于出壳后的第1天、第10天和第28天，腹腔接种DHBV阳性血清。其中，1天龄和10天龄的鸭的病毒接种量分别为100微升，而28天龄的鸭的接种量为10微升，每个病毒拷贝数为7.8×10的8次方。感染后，每隔2周就分离血清进行DHBs/presAg及DHBV DNA检测。

接下来，从DHBV阳性鸭的血清和肝脏中提取DHBs/presAg及甲、乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)，取上述纯化的DHBs/ presAg、DHBcAg各100微升灭活，并进行完全佐剂乳化。当鸭子成熟至8周后(各系统发育成熟)时，通过皮下注射多点免疫，每隔3周1次，连续免疫5次。

【结果分析】在第一轮实验中，1天龄的鸭子接种后，两周后的DFIBs/presAg及DHBc Ag阳性率均达到了89％左右，4周后阳性率达到了94％左右。该比率在随后的22周中没有发生变化。而10天龄的鸭子感染后两周的阳性率仅为16％左右，但在四周后，该比率达到了38％左右。当感染时间增加到6周时，阳性率已达到了61.1％。12周后，50％的鸭子DFIBs/presAg及DHBV DNA转阴，并出现相应的病毒特异性体液及细胞免疫应答。而28天龄的鸭子，其病毒接种量是1天龄鸭子的100倍，但在观察了8周后，没有一只鸭子是阳性的。这表明，通过腹腔接种感染途径，仅1天龄的感染鸭可导致持续性DHBv感染。

【注意事项】该实验应在ABSL-2实验室内进行，并加强个人防护。

北检院部分仪器展示