【操作步骤】首先，取体重2kg左右的家兔，并在无菌条件下先麻醉处死。接着，在口腔黏膜下注射生理盐水，并剥离黏膜，清洗干净后，将其放入0.1mol/L、pH7.4的磷酸缓冲液中，保存于低温冰箱(－70℃)备用。在使用时，将口腔黏膜剪碎并研磨成极细的糊状，放入磷酸缓冲液中制成组织匀浆。为防止污染，添加1：1000乙酸硫汞钠溶液。在免疫动物时，还需加入等量的弗氏完全佐剂。

然后，将试验家兔的背部除毛并进行常规消毒，接着将上述抗原加佐剂的乳化液1ml注入家兔脊柱两侧皮内，每隔2周注射1次，共注射4次，每次注射20点。在第4次免疫后10天，分别自家兔的耳缘静脉采血，以补体结合试验法进行抗体效价的测定。在免疫注射后5个月再采第2次抗体效价测定。实验动物免疫注射后观察5个月，并将试验兔口腔黏膜出现的溃疡进行活体组织检查。最后，以空气栓塞法将动物处死，进行尸体消化道组织学检查。

【结果分析】实验兔免疫注射后，经过5个月的观察，我们发现每只实验兔多次出现了口腔溃疡，最少者出现4次，最多者出现15次，平均每只兔出现8次左右。从第3次免疫注射后起，实验兔开始出现溃疡。在免疫注射4次后的1～2个月内，溃疡频数达到高峰，在免疫注射后第3～4个月出现溃疡次数逐渐减少。实验兔的口腔黏膜溃疡具有以下表现：在局限性充血或不充血的口腔黏膜上出现针头至小米粒大小的圆形或椭圆形溃疡，边缘较整齐，表面覆有一层灰黄色膜，溃疡一般持续2～3天即可愈合。溃疡一般多发生于唇黏膜，少数可发生在口底、牙龈以及上颚部。于第4次免疫注射后第10天，通过兔耳缘静脉采血测定抗体效价，可达到1：2000以上。最后，在免疫注射后第5个月末，口腔黏膜溃疡已经很少出现，抗体效价降为1：40～1：160。

我们通过肉眼观察发现，实验动物的食管、胃和十二指肠皆未出现异常，镜下观察同样见食管、胃、十二指肠亦无异常改变。而口腔黏膜上皮则呈现出坏死、脱落，形成溃疡，其表面被覆盖着大量中性粒细胞和纤维素等渗出物。溃疡底部的小血管扩张充血，组织水肿，大量中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。同时，四周黏膜上皮可见鳞状上皮细胞空泡变性，下方的小血管扩张充血，组织水肿，可见少数中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。

【注意事项】需要注意的是，本试验诱发的口腔溃疡程度与抗体效价的高低是平行一致的。此外，我们建立的实验动物的复发性口腔溃疡(RAU)模型对于研究人类复发性口腔溃疡有着重要的意义。由于目前对RAU的病因学认识不足，因此在临床上尚无治疗RAU的特效药物及方法。我们利用兔口腔黏膜蛋白作为抗原，成功引起了实验家兔发生RAU。而且，其临床表现及组织学检查均与人类RAU相似，从而证明了此动物模型在研究人类RAU方面的重要性。

北检院部分仪器展示