1．原理 让大鼠注射卵清蛋白，以产生IgE抗体。IgE抗体结合在结膜组织内的肥大细胞上，从而产生变态反应。当使用抗原进行攻击时，激活的肥大细胞会释放过敏介质，从而导致局部血管通透性增加，伴有局部嗜酸细胞浸润。注入偶氮蓝后，可以渗透到眼组织内，使组织水肿。根据结膜水肿、嗜酸细胞浸润、肥大细胞脱颗粒程度和结膜组织提取液的光密度，可以判断血管通透性的变化，以反映结膜变态反应的程度。使用DL-二巯基苏糖醇可以增强眼部变态反应，因为它可以破坏结膜的黏液屏障功能，使卵清蛋白这种大分子物质可以更容易地穿透入结膜。

2．模型制作方法 使用体重为250-300克的雄性Wistar大鼠。先使用卵清蛋白磷酸盐缓冲液(PBS)进行腹腔注射，免疫大鼠。14天后，在各眼内滴入1mol/L的DL-二巯基苏糖醇(DTT)溶液20毫升，以消除结膜的黏液屏障，提高致病效果。15分钟后，按1.25毫克/100克体重的剂量，使用偶氮蓝(EB)溶液1毫升，通过鼠尾静脉注射，立即使用微量加样器将10%卵清蛋白PBS液10微升滴入眼内进行攻击。

3．观测指标与分析

(1)组织反应的观察和评分：在局部抗原攻击后的30分钟，在裂隙灯下观察组织反应。使用以下的计分法对反应进行定量评判，每只眼睛最多得到10分。

①血(睑结膜和球结膜)。0分表示正常，1分表示结膜呈粉色，2分表示结膜呈红色，3分表示结膜呈暗红色，有瘀点、瘀斑。

②水肿。O分表示无水肿，1分表示仅下眼睑有水肿，2分表示上下眼睑均有水肿，眼睑部分闭合，3分表示眼睑外翻，水肿明显，眼睑至少半关闭，4分表示上下睑及睑缘均水肿。

③分泌物。0分表示无分泌物，1分表示稀黏液状，2分表示眼睑及周围的毛发潮湿，3分表示眼睑及周围的毛发潮湿，稠黏液状。

(2)结膜血管通透性的判断(偶氮蓝含量测定)：在滴眼攻击卵清蛋白PBS液后的30分钟，取出眼睑、结膜和眼球，去除脂肪。将其称重后，分别置于预先备好的0.5%硫酸钠和丙酮混合液(3:7混合)5-10毫升中，室温下振荡，24小时后，使用分光光度计在620nm处比色测定光密度。将组织称重后根据EB含量计算血管通透性的变化。

(3)组织学检查：在抗原攻击后的30分钟内切除上方的球结膜制备光镜标本。将组织固定在Karnovsky's固定液中，进行乙醇梯度脱水处理，将其包埋在异丁烯酸乙二醇中，切片厚度为2μm，进行HE、PAS和碱性Giemsa染色，进行光镜观察。使用网格为0.25mm×0.25mm的网状计数尺，在3个不同的视野内对结膜上皮、上皮下组织及基质组织中的肥大细胞和嗜酸细胞计数。阳性组结膜上皮内及基质内嗜酸细胞浸润和脱颗粒的肥大细胞明显增多；脱颗粒肥大细胞与肥大细胞总数之比值明显增高。

(4)偶氮蓝(EB)渗出抑制率的测定：通过与相应的生理盐水治疗眼比较，计算出药物的治疗作用。渗出抑制率可按公式I=(P-D)／P×100％计算，其中，I表示渗出抑制率，D为药物治疗眼的平均EB渗出量，P为相应生理盐水治疗眼的平均EB渗出量。

北检院部分仪器展示