杉树花粉诱发豚鼠变态反应性结膜炎模型
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为了建立豚鼠变态反应性结膜炎模型,我们可以采用杉树花粉被动免疫方法,以下是具体步骤:
1.模型制作方法:我们使用7周龄的Hartley系豚鼠,雄性。首先在杉树花粉中加入氢氧化铝佐剂的匀浆,然后用该混合物进行免疫,产生的抗血清可以用Ovary方法测定抗体效价。在抗体效价在160倍以上的血清中混合后,使用豚鼠被动免疫,即进行静脉注射1ml抗血清。接下来,在血清注射后的第10天,将花粉混悬液点眼,以诱发结膜炎,每只眼睛点0.05ml的花粉混悬液(花粉蛋白含量为0.7mg/L)。
2.观测指标与分析:考虑到定量观察结膜炎的严重程度,我们可以进行以下两个指标的观测和分析。
(1) 睑结膜病变观察:在花粉抗原点眼的同时,静脉注射1%伊文思蓝的生理盐水溶液1ml。点眼后,可以观察到结膜充血、肿胀、结膜下出血,蓝色素渗漏到结膜组织中,出现典型的变态反应性结膜炎。
(2) 睑结膜组织中伊文思蓝含量测定:在花粉抗原点眼后30分钟,我们将动物处死并取出整个结膜,并用0.5%硫酸钠与丙酮混合液浸泡48小时,提取出结膜中的蓝色素。然后用紫外分光光度计在620纳米处测定吸收度,将其作为结膜炎相对强度指标。需要注意的是,在实验操作中,豚鼠需要使用戊巴比妥钠(500mg/kg)深度麻醉。
以上就是建立豚鼠变态反应性结膜炎模型的详细步骤及观测指标,希望能为相关研究提供帮助。
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