1. 雪貂流感感染模型的建立

为了建立一种可靠的雪貂流感感染模型，需要先进行血清学筛选，确保所选雪貂为未感染流感病毒的动物。实验中使用SPF鸡胚传代所收获的尿囊液作为实验用病毒。在感染前需要对4～10月龄、体重500～1000g的雪貂进行血清抗体检测，检查A(H1N1)病毒抗体及当即流行的流感的抗体为阴性的雪貂为合格，可入选实验。实验中，雪貂经鼻腔接种10的6次方TCID50(500μl体积)，所有动物实验均在ABSL-3实验室中进行。感染的第5天安乐处死雪貂取材。

2. 实验方法

(1) 实验用病毒：SPF鸡胚传代所收获的尿囊液，病毒液TCID50为10的7次方/ml。

(2) 动物及感染方法：4～10月龄雪貂，体重500～1000g，感染前进行血清抗体检测。雪貂经鼻腔接种10的6次方TCID50(500μl体积)。所有动物实验均在ABSL-3实验室中进行。

(3) 临床观察：记录雪貂的体温、体重以及临床表现，如有咳嗽、流涕、呕吐、腹泻、气促、呼吸困难、明显食欲缺乏等。

(4) 病毒分离：在病毒接种1d后，每天收鼻甲骨活检物，放入1ml DMEM培养液中备用。标本接种MDCK细胞，吸附1h，进行病毒分离。感染后第5天感染雪貂安乐处死，尸检时取肺、气管、肝、脾、脑、肠、心和肾组织，研磨处理后接种MDCK细胞，用火鸡血细胞测定HA确认。

(5) H1N1病毒RNA的检测：在H1N1病毒接种动物1d后，每天收集鼻甲骨活检物，在ABSL-3实验室内提取病毒RNA，通过荧光定量PCR仪直接测定病毒载量。

(6) H1N1病毒抗体检测：动物在处死后采血分离血清，－80℃下保存备用。血清 H5N1病毒性抗体检测(H1方法)具体操作步骤为：每孔加入1：10～1：1280稀释的待检血清，加入8HA的病毒，室温孵育30min，检测凝集结果。

(7) 病理学研究：大体观察，详细观察肺、心、脾、肾、肝、脑、肠以及淋巴结等组织的形态变化；病理切片制备，常规病理组织切片处理后，HE或免疫组织化学染色后，镜检观察。

3. 感染模型指标和结果

雪貂在实验前1周测正常体温和体重，确定正常值。在H1N1病毒接种的第2天时，雪貂体温会升高0.5～1℃，体温升高持续1～2d左右，临床没有死亡现象。雪貂感染后出现流涕、打喷嚏、有呼吸困难、摄食减少、精神萎靡、活动度下降等临床表现。病毒感染雪貂后第1～5天，用RT-PCR方法可从鼻甲骨活检物中检测到病毒载量，病毒载量呈现下降趋势。肺组织和肠组织可分离到活病毒，未在其他组织分离到病毒。大体观察可见肺组织局灶性充血改变。镜检可见肺组织呈局灶性中-重度肺炎改变，表现为肺泡间隔增宽，肺泡壁毛细血管充血、炎细胞浸润。

北检院部分仪器展示