1.材料方法

本研究的实验对象是BALB/c小鼠，体重在15-18克之间。每个动物经由鼻腔滴入100TCID50病毒(50μl体积)，每笼放置5只小鼠。动物感染后每天观察其一般状况，每2天称重一次。感染后第3，5，7，9，14天各处死3只动物取样，另留取10只小鼠观察其体重变化及死亡情况，直到感染后第14天。所有动物实验均在ABSL-3实验室内的隔离器中进行。

进行尸检时取肺组织进行病理学检查。研磨处理肺组织，接种MDCK细胞，每天观察细胞病变，持续观察3天，并用HA方法进行确认病毒分离。H5N1病毒感染动物3天后处死，取肺组织放入1ml裂解液(Qiagen)中，用研磨器充分研磨，离心后取上清放入buffer RLT(已加入1％巯基乙醇)350μl，4℃ 13000 rpm离心3min，将上清转移至新1.5ml微量离心管中，提取样品病毒核酸。将RNA逆转成cDNA，通过荧光定量PCR仪直接测定病毒载量。提取病毒RNA操作步骤在ABSL-3实验室内完成。

病理学检查是对肺，心，脾，肾，肝，脑，肠等组织的形态变化进行详细观察，切片制备，10％甲醛固定，石蜡包埋，常规病理组织切片处理后，HE方法染色后，镜检观察。

2.BALB/c小鼠感染H5N1模型指标和结果 BALB/c小鼠攻毒后第1天开始活动减少，拒食，竖毛等表现。第3天开始出现死亡病例，攻毒后第7天全部死亡。RT-PCR检测结果显示肺组织中存在大量H5N1病毒；病毒分离结果显示小鼠病毒在小鼠体内的复制高峰期是第2～6天。解剖可观察到小鼠肺实变，表面呈暗红色。病理学改变表现为局部支气管黏膜上皮坏死、脱落，黏膜炎细胞浸润明显，肺泡腔内有渗出，肺间隔内轻度增宽，为重度间质性肺炎(图8-4)。通过血清H5N1病毒特异性抗体检测可得知病毒抗体的信息，数据表明，小鼠感染后可生成H5N1病毒抗体。

北检院部分仪器展示