1 自体血血栓注入法(autologous blood emboli)

自体血血栓注入法用于制造动物缺血性脑卒中模型，该模型非常符合人类脑血栓形成的临床特点。下面是具体的操作步骤：

(1) 操作方法

准备一个PE-50导管(外径0.3mm，内径0.2mm)，并将其接到微量加样器中。然后，将凝血酶(1×1000000U/L)注入导管中。注射戊巴比妥钠(按50～60mg/kg体重的剂量)或水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)麻醉后，将动物仰卧固定于手术台上，剃除颈部毛发，再对手术区域消毒。

接下来，将颈部正中位切口，并将颈肌肉钝性分离，以便于取出双侧颈总动脉(OCA)、左侧颈外动脉(ECA)。分离并结扎左侧ECA分支，同时剪断其近端，然后将远端线头下拉，使其与颈内动脉(ICA)接近一直线。分离出左侧ICA并轻轻剥离迷走神经，至鼓骨下缘可见ICA惟一颅外分支翼腭动脉，结扎该动脉，使ICA成为CCA颅外惟一保留动脉。使用微动脉夹夹闭ICA及OCA，然后在ECA的起始处打一松结。在ECA上距颈动脉分叉处约3mm的位置剪一小口，从口中将导管插入ECA管腔，并进入ICA，将ECA起始处的尼龙线扎紧以防止导管移动及出血。移除ICA上的微动脉夹，并继续将导管插入ICA约10mm，此时，导管前端距MCA起始部2～3mm。

接下来，抽取约10μl动脉血进入导管，停留约10min以形成栓子，并暂时用微动脉夹夹闭对侧CCA以降低脑血流。然后将导管中的栓子连同约10U凝血酶缓慢注入ICA。移除右侧CCA上的微动脉夹后等待5min，10min后拔出导管，再结扎ECA近端。然后等待15min后移走左侧OCA上的微动脉夹，并缝合皮肤。最后，将动物单独饲养。

(2) 主要检测指标

1) 行为障碍评分：于注射栓子后3、6、12h观察动物行为障碍的程度并进行评分，将行为障碍分为5级，评价方法详见记录。

2) 大脑动脉环检查：在手术后12h将存活动物断头，取出脑组织，在手术显微镜下观察大脑动脉环及其分支有无栓塞表现。

3) 脑梗死体积测定：将脑组织置于-22℃冰箱快速冷冻15min后，由前向后每隔2mm切取组织片7片，置2％红四氮唑(TTC)溶液中37℃孵育30min，不显色部分即为梗死组织。将组织片置入4％甲醛溶液中固定3～5h，然后将每片组织照相，经图像分析系统测量各层面面积、梗死面积、结合切片间距计算相应体积(mm3)，并计算梗死体积占对侧大脑半球体积的百分比。

4) 病理检查：将脑组织置于4％甲醛溶液固定72h，常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察脑病理形态及MCA起始部栓子的构成。

(3) 模型特点

该模型具有以下优点：①直接插管至MCA起始部诱导血栓形成，梗死灶的大小和部位稳定。②由凝血酶诱导血栓形成，更接近于临床脑梗死的病理特点，血栓的组成成分与颈总动脉硬化斑块相似。③对

北检院部分仪器展示