1.造模方法

为了排除特殊病原体的影响，在SPF环境下，选取3-5周大小的C3H/HeN(C3H)雌性小鼠用于制作莱姆病感染动物模型。伯氏疏螺旋体的N40亚型在BSK Ⅱ(Barbour-Stoenner-Kelly Ⅱ)培养基中培养，保持在34℃的温度下，当其密度达到100,000/ml时可以进行接种实验。首先用乙醚麻醉小鼠，然后向小鼠背部接种10,000个N40亚型螺旋体，从小鼠尾静脉抽取血液样本检测其感染情况。在造模的14天时，小鼠体内可出现伯氏疏螺旋体引发的全身中毒症状。

2.模型检测方法

(1)酶联免疫吸附实验：采用ELISA检测伯氏疏螺旋体的IgM和IgG抗体滴度的变化情况，以此来确定小鼠是否成功制作成莱姆病感染动物模型。在本实验中，使用兔抗小鼠特异性抗体检测模型动物体内IgG1、IgG2a和IgG2b抗体。将0.5μg/ml稀释后的特异抗体加入到酶标板内，在4℃下孵育一夜后，用含10％FCS的PBS进行封闭。两小时后，用PBS洗涤三次，加入感染病原体14d和60d的动物模型血清，并将血清稀释100-500倍，室温孵育1小时。接着，加入特异抗血清抗体，室温孵育1小时。PBS再次冲洗四次后，加入HRP标记的羊抗兔IgG，在室温下孵育1小时后，利用过氧化氢在450nm下的波长进行信号检测。

(2)组织病理学检测：在实验结束后，把感染模型的小鼠进行二氧化碳或心脏取血处死，取出心脏和后肢相关联的组织，如膝盖、踝关节和趾骨，并将它们放入含有10％福尔马林的溶液中浸泡。要对关节组织进行脱钙处理，然后架有石蜡，进行HE染色，观察镜片下的伯氏疏螺旋体变化。在模型中，伯氏疏螺旋体感染会导致关节炎形成，导致关节间隙中出现纤维蛋白和白细胞渗出，而关节滑膜细胞脱落和增生，导致关节滑膜增厚。心脏受损会导致单核细胞、白细胞、浆细胞和中性粒细胞渗出到关节滑膜腔和动脉外膜处，并在心肌和心外膜中集中炎症细胞。

3.模型特点

小鼠莱姆病感染动物模型是目前使用最广泛、经济实用的感染模型。尽管许多品系的小鼠对螺旋体具有一定的敏感性，但不同遗传背景和感染龄期的影响导致感染后的动物模型表现出不同的症状。在本实验中，C3H小鼠感染后，表现出严重的关节炎和心肌炎；而BALB/c型小鼠则表现出轻度的关节炎症状和严重的心肌症状。因此，在根据实验需要选择适合的小鼠品系时，需进行详细的考虑。

北检院部分仪器展示