肾虚证动物模型

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肾是人体的先天之本,而肾虚是中医主要的证候类型之一,包括肾阳虚、肾阴虚、肾气虚和肾精虚等证型。肾阳虚是其中最为常见的证型,肾阳乃是人体的元阳,肾阳的温煦和推动对人体各个器官的生命活动至关重要。

下面介绍三种造模方法,具体如下:

【一)房劳过度法】

该方法根据中医的“房劳过度致肾虚”理论,通过使小鼠过度疲劳和频繁交配,最终造成肾虚动物模型。

具体方法:将雌性小鼠皮下注射长效避孕针剂,经过3天左右进入动情期,用阴道涂片检查角化细胞,确定其已处于动情期。然后将雄鼠与一只有阴道栓的动情雌鼠共笼1天,之后再将雄鼠与5只同期动情雌鼠共笼,并注意及时更换动情期雌鼠。雄鼠每天上下午各游泳1次,每次在无力继续游动,将要下沉时捞出。

通过观察和测定,可以发现动物逐渐出现畏寒怕冷、萎靡少动等肾阳虚症状,4周后将其处死,快速取出胸腺、肾上腺和睾丸等脏器进行相关指标测定。总体来说,动物体重、睾丸重、胸腺重、睾丸乳酸脱氢酶总活性、乳酸脱氢酶同工X相对活性皆减小。

该模型的造模因素符合中医肾虚证的成因,因此已经广泛应用于肾虚证和衰老的病理研究以及补肾中药的药理研究。

【二)苯甲酸雌二醇法】

该方法通过小鼠的腹腔注射苯甲酸雌二醇,引起下丘脑-垂体-性腺轴受抑而造成肾阳虚模型,观察到小鼠出现活动能力减弱、抗疲劳下降等表现。

具体方法:对ICR小鼠按0.1ml/10g腹腔注射0.4mg/mm苯甲酸雌二醇大豆油稀释液,每日1次。连续注射15天,造成肾阳虚模型。针对小鼠的体征、肛温、抓力、游泳时间、自主活动、血清肌酐及尿素、血液学指标、睾丸和精囊腺指数进行测定。

该模型小鼠出现皮毛汗湿竖立、精神萎靡、弓背萎缩、喜挤卧而不喜动等肾阳虚症状。肛温明显下降,游泳时间减少,小鼠抓力减弱,自主活动次数减少,血清肌酐及尿素升高,红细胞参数有所增高,白细胞参数降低或不变,睾丸和精囊腺指数均减小。

该模型已经引入现代医学的检测手段和指标,并广泛用于肾阳虚药理的研究。

【三)甲状腺切除法】

该方法通过甲状腺切除造成甲状腺功能减退者体内的代谢减慢,基础代谢率降低等症状,进而造成“阳虚”动物模型。

具体方法:选取体重在(280±20)g之间的Sprague Dawley大鼠,在室温下饲养,随意饮水和进食。切除大鼠甲状腺,继续喂养。

该模型大鼠在切除甲状腺7天后,就会出现少食少饮、体重减轻、反应迟钝、活动减少、拱背耸毛、毛色无光泽、易脱落、大便稀溏等肾阳虚症状。

该模型可结合差异蛋白质组学技术进行研究,探究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组,进一步研究肾阳虚大鼠的发病机制。

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