EV71动物模型的制备

1.灌胃感染7日龄ICR小鼠模型

为了研究灌胃感染C2亚型小鼠适应株对7日龄SPF级ICR幼鼠的感染和病理过程,我们在ABSL-3级实验室进行了实验。我们灌胃感染了5×1000 000pfu只小鼠,并在每天观察小鼠的过程中,观察了小鼠的一般状况,包括皮肤、口、四肢、被毛、活动和精神状况。攻毒后每天称重1次,攻毒后1~5d每天安乐相同数量的小鼠(3~10只),并取组织或样本:粪便、血液、小肠、颈髓、胸髓、腰髓、脑干、肌组织、心、肺、肝、脾、肾。同时设立细胞培养上清灌胃感染小鼠做对照,进行大体解剖比较。组织研磨处理后接种RD细胞,每天观察细胞病变,测定组织中病毒效价。

在实验中,我们发现小鼠在攻毒后3 d开始表现出衰弱、体重下降、后肢瘫痪、并于7~8d后死亡。自第3天开始,小鼠的神经组织、肌肉和血液内均可检测病毒,效价达100pfu/ mg组织以上,其中以肌组织中病毒效价最高。同时,神经组织、肌组织、肝、脾和小肠发生病理改变,如图19-5所示。我们还进行了组织病理检查,经常规病理程序,进行固定,包埋,切片处理后,HE方法染色,镜检观察,或进行免疫组化染色,评价组织中病毒的分布。

2.静脉注射感染猕猴模型

我们在ABSL-3级实验室进行了研究,旨在研究A型临床分离株对6~17岁成年雄性猕猴的感染和病理过程。我们采用了右胫骨静脉注射攻毒剂量为5×100 000TCID50/只的方法。在每天观察动物的一般状况,包括皮肤、口、四肢、体重、活动和精神状况的过程中,我们发现猕猴在攻毒后3d开始表现出震颤和共济失调,不发生皮肤病变和肺水肿症状。病毒主要在猕猴的大脑、小脑和脑干中复制,在心、肝、脾和肾中未分离到病毒。同时,我们每天安乐感染动物,取脑和脊髓组织,并进行大体解剖比较。组织研磨处理后接种RD细胞,每天观察细胞病变,测定组织中病毒效价。

在组织病理检查中,组织样本经过常规病理程序,镜检观察或进行免疫组化染色,评价组织中病毒的分布。我们发现在小脑可观察到炎细胞浸润,脊髓中可见神经元消失和变性。

通过这两个模型的研究,我们对病毒感染的机理和病理变化有了更深入的了解,为进一步研究防治病毒感染提供了重要的实验依据。

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