小鼠模型

1. 病毒及攻毒:在此实验中,使用了Zaire亚型的埃博拉病毒,攻毒剂量为100pfu(3000 LD50),采用腹腔注射方式进行。

2. 实验动物:使用了8周龄SPF级BALB/c小鼠作为实验动物。

3. 实验环境:实验环境为BSL-4级实验室,采取严格的防护措施,确保实验安全。

4. 实验步骤:除了观察动物的一般状况外,每天还需要称重一次。攻毒后1~5天,每天安乐同样数量的小鼠(3~10只),并取血及收集多个组织样品,包括淋巴结、纵隔膜、脾、肝、肺、心、脑、肾、胃肠道、生殖系统、胸腺、肾上腺、骨髓等。同时设置未攻毒的小鼠对照组。

5. 病毒分离:在解剖时,取出上述组织样品,经过研磨处理后接种至Vero细胞中,每天观察细胞的病变情况。

6. 病毒RNA的检测:取上述组织样品,放入1ml裂解液(Qiagen)中,并经过研磨器充分研磨。离心后,取上清放入buffer RLT(已加入1%巯基乙醇)350μl,于4℃-13000转/分离心3min,将上清转移至新1.5ml微量离心管中。然后提取样品病毒核酸,将RNA反转录成cDNA,并通过荧光定量PCR仪直接测定病毒核酸载量。

7. 病毒抗体检测:不同时间点处死采血分离血清,冻存于-80℃下备用。然后使用特异性ELISA试剂盒检测抗体水平。

8. 病理观察:解剖时,取出上述组织样品,并详细观察各组织的形态变化。然后,将各组织标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,常规病理组织切片处理后,进行HE染色并进行镜检观察,以进一步了解病毒感染对各组织的影响。

9. 建模结果:这项实验得出的结论是,在攻毒后3天,小鼠开始发病;5~7天后死亡。死亡小鼠的肝及脾内可检测到病毒效价高达10的9次方pfu/g。同时,在肝和脾组织中发生了病理改变,并且血清中的转氨酶(AST和ALT)水平也明显升高,与被ZEBOV攻毒的灵长类动物模型的病理表征相似。然而,与灵长类动物不同的是,在小鼠组织中仅有少量的纤维蛋白沉淀,并且只有通过腹腔攻毒才能致死,使用其他攻毒途径时,即使剂量加大,小鼠仍能存活。

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