小鼠和大鼠是生命科学实验室中常用的实验动物，它们被广泛用于研究疾病机制、药物筛选等领域。其中条件性基因敲除小鼠是一个重要的研究工具，利用Cre/LoxP或Flipe/Frt原理进行设计，可以在特定的细胞中敲除目标基因，达到时空两方面的调控。这里以Cre/LoxP系统为例，对条件性基因敲除小鼠的设计做一个简单介绍。
Cre/LoxP系统来源于噬菌体，由两个组成成分组成：一个是长34bp的LoxP序列，含有两个13bp的反向重复序列和一个8bp的核心序列，令一个组成部分是Cre重组酶。Cre重组酶可以介导两个LoxP位点之间的DNA序列重组，从而引发两个LoxP之间DNA序列的缺失，起到敲除目标基因的作用。因此，设计条件性基因敲除小鼠时，就需要在目标DNA序列的两端各放置一个LoxP序列，得到flox小鼠。将flox小鼠与带有细胞特异性表达Cre的小鼠交配，即可在特定的细胞中实现敲除目标基因的目的，即得到条件性基因敲除小鼠。
然而，在设计flox小鼠时，需要注意LoxP序列的放置位置，不能破坏或改变启动子活性，最好不在第一个外显子前放置。此外，在选择要敲除的外显子时，要选取不含起始密码子ATG且碱基数不为3N的外显子，敲除后可产生移码突变，达到基因敲除的目的。需要从最上游的外显子开始筛选适合敲除的外显子，核对内含子和外显子的边界，95%以上的边界遵循gt/ag边界原则。当然，设计条件性基因敲除小鼠需要根据具体情况进行考虑，不同的实验目的可能需要不同的策略。
总之，条件性基因敲除小鼠是一种灵活、可控的基因敲除方法，可以为研究人员提供更多的实验手段和分析结果，具有广阔应用前景。
