HLA-B2704转基因小鼠自发性前葡萄膜炎模型

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1.模型制作方法

本研究使用首建转基因阳性鼠(founder)间交配获得F1代,姊妹间交配获得F2代,动物包括首建转基因小鼠、F1和F2代。我们在阳性动物上进行了如下检测:

  • 目的基因整合和拷贝数检测:通过鼠尾DNA提取后,经PCR 2对引物初筛,进一步采用斑点杂交和Southern杂交鉴定,探针为615 kb HLA2B2704基因,碱性磷酸酶直接标记和检测试剂盒。
  • 阳性动物表达检测:通过剪鼠尾取血,溶解红细胞获得周围血淋巴细胞,然后应用免疫组织化学和流式细胞术检测目的DNA表达水平。一抗为HC10抗体(抗HLA2B27重链特异单抗)和HLA-ABC class I(抗人HLA I类分子特异抗体),SP免疫酶标试剂盒方法按说明进行。最后使用FITC标记的羊抗鼠进行检测。

2.观察指标与分析

(1)眼部检查:在裂隙灯下可见角膜后沉淀。解剖镜下观察视盘水肿不明显,视网膜血管无明显扩张。

(2)眼病理学检查:研究发现角膜外层上皮细胞增生,柱状上皮排列紊乱,中层胶原纤维排列不整且细胞数目增多,内上皮层细胞肥大,某些部位可见上皮细胞脱落。房水检查发现前葡萄膜炎小鼠房水总细胞数增加,炎性细胞比例较正常小鼠明显增高。细胞分类包括脱落上皮细胞,虹膜色素细胞,淋巴细胞和少量单核细胞等。

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