大鼠自体血栓大脑中动脉闭塞模型

1. 大鼠自体血栓建立大脑中动脉闭塞模型的材料:Wistar大鼠,雌雄各半,体重在250~350g之间;6%水合氯醛,凝血酶,枸橼酸钠(0.109mol/L)等药物;生理多导仪、硬脊膜外导管、22G静脉留置针等器械。

2. 大鼠自体血栓建立大脑中动脉闭塞模型的方法:

(1) 抽取动脉血:先将大鼠用6%水合氯醛溶液35mg/100g体重腹腔注射麻醉,然后分离并结扎颈部的右侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA),并结扎翼腭动脉,随后游离颈外动脉(external carotid artery, ECA)远端并结扎之,凝闭其分支,用微血管夹夹闭CCA、ICA后在紧靠结扎线的近心端剪开 ECA,插入22G留置针,打开CCA处微血管夹,抽取动脉血0.5ml后在距颈动脉分叉1mm处结扎ECA近心端,远端注入少量肝素盐水,打开血管夹。

(2) 制备改良血栓:将0.5ml动脉血立即注入含有0.75μl枸橼酸钠(0.109mol/L)的EP管内,混匀后5000r/min离心1min。取贫血小板血浆160μl、RBC10μl与1单位凝血酶(25万单位/L)、30μl氯化钙(0.5mol/L)溶液混合,立即将其吸入内径0.58或0.65mm的塑料管内,2min后将血栓移至磷酸缓冲液中,可以得到直径0.35mm或0.45mm的浅红色血栓。在手术显微镜下将其剪为长约2mm的小节,依次吸入6个血栓于PE50管内,血栓之间间隔2~3cm,备用。

(3) 注入血栓:在血栓制好后模型组再次将动物麻醉,暴露颈部动脉,血管夹夹闭CCA、ICA后解开或剪开ECA近心端的丝线,由ECA切口处再次插入并固定留置针,除去针芯后打开ICA处血管夹,可看到ICA返流出的血液,待留置针内的气体完全被排出后,接PE50管,其另一端与吸有0.25ml磷酸缓冲液的注射器相连,依次注入血栓(约30s),结扎ECA,打开CCA处血管夹,缝合切口。假手术组操作过程同模型组,但只注入缓冲液0.2ml。

3. 大鼠自体血栓建立大脑中动脉闭塞模型的原理:利用大鼠自体血栓建立大脑中动脉闭塞模型。

4. 造模后的变化: MRI结果显示,在MCAO后15min,标本中出现DWI的异常信号,并由尾、壳核外侧部、顶叶皮质逐渐扩展,并在H-MRS上看到相应部位出现乳酸信号,乳酸峰逐渐加深。神经功能缺损评分:模型组得分明显小于假手术组。模型组动物可在MCA和ICA内找到血栓。MCAO后30min可看到血栓位于MCA入口处和ICA内,MCA被完全栓塞。病理观察显示血栓含量在90%以上。MCAO后6h的HE染色可以观察到右侧大脑半球存在大量神经元坏死,纹状体外侧部受损最为明显。

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