皮层注射氯化亚铁建立外伤性癫痫动物模型

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1.造模材料 我们采用健康成年雄性SD大鼠进行实验,体重约在180~220g之间。药物方面,我们使用10%水合氯醛和FeCl2溶液。

2.造模方法 在进行实验之前,首先要使用10%水合氯醛(350mg/kg)对大鼠进行腹腔麻醉。然后,将大鼠固定在立体定向架上。接着,根据注射部位确定钻颅的位置。在钻开颅骨之后,我们依照包新民等人(1991年)的大鼠脑立体定位图谱,使用微量进样器缓慢进针至靶点。针头进入大鼠右额叶皮质坐标为:前囟前2.0mm,中线旁3.0mm,硬膜下2.0mm。接着,在右额和右枕各钻一孔,安装不锈钢电极,并将其固定。最后,将参考电极放置于右耳,连接于POWERLAB生理记录仪。开始记录脑电图,经过10分钟后,使用自动推进器向靶点缓慢注射FeCl2(0.1mol/L)1000nmol,速率设置为1μl/min。注射后,留针5分钟。需要注意的是,假手术对照组在同一部位注入等量的生理盐水。

3.造模原理 铁具有致痫作用,这是我们进行模型制作的原理。

4.造模后的变化 通过使用上述的造模方法,我们成功地制作出癫痫模型。在模型组中,注射FeCl2成功致痫后,大鼠出现了凝视、不动的情况,呈现出阵发性痉挛。之后,大鼠开始表现出湿犬样运动,或出现自动症,如重复、刻板地点头、咀嚼、哈欠、喷嚏等,伴有面部抽动,并且还出现了轻度惊厥。而且,一侧前肢会出现震颤,双前肢震颤及持续性点头,或者出现全身性强直一阵挛性发作等症状。在病程方面,模型组的病程明显地分为急性期、静止期和慢性期。在7天内,尤其是前3天内,发作频繁。此后随着时间的推移,发作次数逐渐减少,15天后出现较规律的发作,以局灶性发作多见。与此同时,正常大鼠的EEG之频率以5~10Hz为主,波幅小于200V。而在模型组中,即使在灌注FeCl2的潜伏期结束后,大鼠EEG仍会表现出多种形式的癫痫样放电波形。典型波形包括单棘波、多棘波、多相棘波、双相棘波、正相棘波、棘节律、慢波、棘慢波、慢波叠加棘节律、尖波、发作性节律波、发作后抑制等。最快的频率可达到30Hz,波幅高达310V,而且发作后还会出现抑制波。

5.造模后病理变化 在观察模型组大鼠的病理变化时,我们发现注射FeCl2成功致痫后,实验侧右额叶出现了明显的萎缩,呈现出棕黄色,这是因为含铁血黄素沉积导致的。通过光镜下的观察,我们发现模型组注射部位的神经元出现了明显的变性、死亡。此外,细胞的结构也发生了一定的瓦解和紊乱。实验侧海马神经元缺失比较明显,其中以CA3区最为显著。模型组中的大脑皮质和海马CA1、CA3区细胞密度都明显低于对照组。另外,模型组注射灶及其周围还出现了大量呈Perls阳性的吞噬细胞浸润。吞噬细胞几乎占据了整个病灶,巨噬细胞深染居外周。在病灶周围,胶质细胞反应也增强,细胞数量较多,染色深蓝色,成长出长短不一的突起。而对照组则没有发现任何明显变化。

6.注意事项 在进行这项实验之前,必须对手术器械进行严格消毒,防止手术感染。手术创伤应尽可能小,操作时需严格遵守无菌操作。颅骨钻孔时,一定要注意深浅。如果一旦出现突破感,应立即停止,避免大量出血。

术后的大鼠应该被分别安置,等待它们苏醒后再合笼饲养。这样可以避免已经苏醒的大鼠去舔咬昏迷大鼠的伤口。在饲养室内,需要尽可能地保持大鼠的最适温度和湿度。

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