猕猴乙型肝炎模型

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(1)复制方法  为了使得实验有效,需要将HBV阳性血清注射到健康猕猴的体内。这些猕猴必须首先进行HAV、HBV、HCV标志物检测,确认为阴性后才可以作为实验对象。被注射的HBV阳性血清来自无症状的HBV携带者,其HBsAg、HBeAg、抗-HBc和HBV-DNA的相关指标为强阳性。在接种HBV阳性血清后的第4、8、12周,实验猕猴将在氯胺酮麻醉下进行肝穿刺和肝切术,得到标本并固定在10%甲醛溶液中。常规组织切片后,使用HE染色并在光镜下观察;此外,还需取肝组织制备出透射电镜的超薄切片,以便使用电镜下观察。

(2)模型特点  在感染观察期间,实验猕猴未出现黄疸、食欲差、精神不振或体重减轻等表现。虽然恒河猴在感染HBV后没有明显的肝炎症状,但急性肝炎病变相对较轻,而且仅部分实验猴ALT有一过性升高。在光镜下观察可发现,部分肝组织出现轻微的肝炎病变,肝细胞表现出气球样变,部分区域甚至有点状坏死,但小叶间隔的结构仍然完整。在电镜下,可以观察到更多的圆形、管形、和完整的乙型肝炎病毒颗粒Dane颗粒,在感染1周后,Dane颗粒明显减少,到8周时Dane颗粒的数量已经极少。免疫组织化学检测到肝细胞内表达了HBs Ag,而原位杂交检测证实在肝细胞内存在HBV DNA。同时,在血液中HBs Ag可持续阳性7-8周。

(3)比较医学  在HBV进入模型动物体内后,机体内的网状内皮系统,尤其是肝内的固定吞噬细胞(肝巨噬细胞)可以将HBV从血液中清除,并防止病毒进入肝细胞。在体液免疫方面,激活的B细胞会产生抗S1和抗S2抗体,并在抗HBV感染早期起到关键作用。因此,HBV感染模型的成功与实验动物的年龄、体重以及机体免疫系统等多种因素密切相关。在病理学上,本模型的肝组织病变与人类乙型肝炎病变基本相似。但值得注意的是,除了猕猴之外,黑猩猩、长臂猿和绒毛猴等高等非人灵长类动物也能作为HBV感染的实验动物模型,其中黑猩猩是最敏感的,但受到道德、经济和实验条件难以控制等诸多原因的限制,这些高等灵长类动物的使用受到了一定的限制。

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