卵白蛋白激发的哮喘模型

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1.豚鼠模型

豚鼠是一种常用的哮喘模型动物,用于研究哮喘的药物治疗方法和病理生理机制。制模过程中,选用健康雄性豚鼠,体重300~500g,进行腹腔注射10%卵白蛋白生理盐水溶液10ml,使豚鼠处于致敏状态,然后在2周后以10%卵白蛋白生理盐水溶液雾化吸入20min,从而诱发豚鼠哮喘发作。也可以选择200~300g豚鼠,雌雄不限,于第1d和第8d分别进行0.5%卵白蛋白生理盐水10ml腹腔注射,第16~20d将致敏的鼠置于密闭容器内,用1%卵白蛋白气雾激发,使动物逐渐暴露在卵白蛋白气雾中10~30min,直至出现哮喘为止。

制模过程中豚鼠出现气喘、咳嗽,病理表现包括毛细血管扩张、嗜酸性粒细胞浸润和腺体分泌活动的亢进。该模型的缺点是豚鼠对鸡卵蛋白(OVA)反应的个体差异较大。有些豚鼠可能不出现哮喘反应,而一些动物则可发生急性过敏性休克。

2.大鼠模型

大鼠哮喘模型是哮喘研究中常用的模型之一,其制作方法是选用成年雄性Brown-Norway大鼠、SD或Wistar大鼠,分别进行腹腔注射1ml生理盐水含OVA 1mg、A1(OH)3 100mg,从第14d开始进行1%OVA约3~5d的雾化吸入。激发后3~5min产生速发相反应,2~4h产生迟发相反应,6h肺部出现肺水肿及中性粒细胞聚集,随后多种细胞包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润,24h主要为嗜酸性粒细胞。

非致敏大鼠肺泡灌洗液(BALF)中主要是肺泡巨噬细胞(95%)和单核细胞。一次激发后18~24h大鼠气道高反应性(AHR)增加,幅度约为7~10倍,激发后5天气道高反应性恢复正常。多次激发可延长AHR持续时间(激发后5天仍有,这时BALF中炎性细胞改变已不明显),但不能使AHR进一步增加或使炎症反应加重。

大鼠模型适用于特异性抗原抗体的研究,有速发和迟发双向反应。哮喘的发生也与大鼠的品系和性别有关,该模型对Brown-Norway大鼠的排异反应很少,适合于哮喘气道炎症和AHR的研究。

3.小鼠模型

BALB/c小鼠是哮喘模型研究中最常用的模型动物之一。其制作方法是分别将0、10、100、1000μg剂量的鸡卵蛋白(OVA, Grade V,  Sigma)加40mg氢氧化铝溶于pH7.4的PBS 0.2ml中,于第0、7、14d分别给4组小鼠腹腔内注射。第15~20d为雾化激发阶段,将小鼠放入雾化吸入箱,通过雾化发生器雾化吸入5%OVA生理盐水液,每天1次,每次20min,共6d,小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛、两便失禁为阳性反应。制作完毕后,OVA特异性抗体IgE、IgG2a的测定使用ELISA检测试剂盒。

小鼠模型制作过程中需要多次致敏,并多次激发。激发后血清IgE水平升高,肺血管周围及支气管周围Eos浸润,24~48h支气管肺泡灌洗液(BALF)中Eos明显增加,不同品系小鼠对OVA的免疫反应也不同。由于小鼠受体免疫基因(MHC)具有多样性,因此小鼠常用于研究哮喘发病机制和药物治疗策略。

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