脑积水动物模型

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脑积水是一种颅腔内脑脊液量异常增多的疾病,其发生原因多种多样。动物模型的建立通常采用大鼠或家犬进行,其中最常用的是大鼠。

(1)模型制备方法

1)雄性大鼠,体重为200~250g。用水合氯醛或戊巴比妥钠进行麻醉后,固定仰卧位,去除头颈部皮肤毛发,消毒。在显微镜下,沿后颈部正中至头颈交界处作一长为4~5mm的纵向切口,暴露环枕筋膜。用注射针头穿刺枕大池,取出0.06~0.1ml的脑脊液,并注入25%的白陶土灭菌混悬液0. 1ml进行注射,注射时间不少于10min。拔针后用医用耳脑胶封闭针眼,缝合切口,并维持头低位15~20min。对照组则注入生理盐水0.1ml。术后给予抗感染治疗,每天2万U的庆大霉素或50mg/kg的头孢唑啉钠,连续5天。每日清洁伤口两次,直至伤口愈合。

显微镜下进行手术能够减少手术的死亡率,避免反复穿刺,穿刺时要维持颈部屈曲约30°,穿刺角度与水平线成60°~70°角,穿刺深度约1mm。此外,体重为10~15kg的实验犬也可以进行模型制备,经静脉注射戊巴比妥钠麻醉后,行枕大池穿刺,取出3ml脑脊液,并按0.3ml/kg体重剂量向枕大池注入等量的25%白陶土灭菌混悬液。

2)评价指标

①脑积水的鉴定:可采用磁共振波谱成像仪行MRI检测,获取连续层厚1mm的脑冠状切面T2图像,并测定第三脑室平面侧脑室大小,计算侧脑室指数(侧脑室指数=侧脑室最大横径/同一层面脑组织最大横径)。

MRI检测后,大鼠注射25%白陶土混悬液1周后脑室明显扩大,伴随脑室周围的白质水肿,至第4周时更加明显。

②标本制作:在MRI检测后,用水合氯醛过量麻醉,开胸后迅速用4℃生理盐水(50ml/100g)和4%的多聚甲醛(100ml/100g)经心脏灌洗,然后取出脑组织,用10%甲醛固定24h后石蜡包埋,连续作厚约4μm的冠状位切片,进行常规HE染色,以得到光镜观察的结果。

3)病理组织学检查:病理解剖发现大鼠脑表面蛛网膜下腔在小脑和脑干表面有白陶土沉积,蛛网膜下腔粘连闭锁。白陶土注射后1~2周,大鼠脑室系统即有明显扩大,以侧脑室前角最为显著,大脑皮层因受压变薄,以顶叶最为明显。海马因受压而变形,白质内细胞外间隙因水肿而扩大。白陶土注射后3~4周,脑室系统进行性扩大,脑室周围的白质,尤其是胼胝体出现纤维扭曲和萎缩、间隙增宽、有纤维撕裂。

脑积水的各个阶段均存在着神经细胞形态的改变,如线粒体、内质网、细胞核等变化。脑积水过程中,深部皮质锥体细胞的突触和其他突起减少,核周细胞质边缘浓度低,核糖体少见,粗面内质网有空泡并肿胀,高尔基体少至罕见,大部分延伸的线粒体都有被破坏的嵴,中心粒减少。胶质细胞小且少见,距离神经元远。细胞外常可见空泡状间隙,有髓轴突含髓鞘层数少,稍大的神经元轮廓经常是半透明状,且空泡化,没有细胞质成分。脑积水进展时,上述变化变得更加明显。在脑积水的晚期

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