(1)复制方法 在实验前，先对体重为2-2.5kg的实验兔进行双眼滴眼，每日4次，连续3天，使用0.25%氯霉素眼液。第4天，按照体重每千克给予2毫升的剂量，经耳缘静脉注射1.5%戊巴比妥钠麻醉。然后使用0.4%的Benoxile液滴眼表麻。
选择直径为8mm的铜冷冻探头，将其浸入液氮中数秒，然后垂直放于兔角膜的表面，与角膜中央充分接触，持续时间在5-15秒之间。这种方法操作简单，而且可以监测温度，保证内皮损伤的准确性。
(2)模型特点 通过冷冻损伤的方式，可以完全破坏模型动物的角膜内皮细胞，使得内皮损伤区域与未受损区域之间的界限更加清晰。采用不同时间的冷冻，可以造成相近面积的缺损，但5秒的冷冻时间会导致角膜水肿较轻。伤后3天，只有部分角膜内皮已经愈合。4天后，所有的角膜内皮缺损都被新生的内皮细胞所覆盖，但这些细胞大小不一，形态也很不规则。12天后，再生的内皮细胞已经趋于稳定，大小也基本一致，形态为多边形。
(3)比较医学 角膜内皮损伤模型的建立是研究内皮损伤后的自发反应和药物影响的基础。不同的角膜内皮损伤模型，其稳定性和可靠性各不相同。机械损伤法一般通过切除动物自身角膜，采用棉签拭去内皮，再将角膜植片重新缝合在自体植床上。这种方法难度较大，操作比较困难。另外一种方式是在角膜缘做切口，将特制的器械置入前房进行刮除，这种方法在操作过程中对角膜基底膜及其他组织的影响相对较小，但是会增加眼内感染的机会。超声波损伤法通常通过放置晶体超声乳化器，使用非接触式的超声波损伤方式使内皮受损。碱烧伤法是将一定直径的浸有1mol/LNaOH溶液的圆形滤纸片放在兔角膜表面，接触1分钟完成内皮损伤。虽然此种方法简单，但内皮的双相愈合过程更加复杂。而全角膜冷冻法则可以使用低温金属冷冻探头，在简单易行的操作下，完成内皮损伤。本模型方法采用直径为8mm的铜冷冻探头进行冷冻，使用温度监测装置，使冷冻时间更加准确，提高了模型的稳定性和可靠性。因此，这种方法为研究角膜内皮愈合的药物提供了一种简单易行、重复性好的内皮损伤动物模型。
