硫代乙酰胺(TAA)诱发肝衰竭模型

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(1)复制方法  为了制作肝衰竭动物模型,可以采用硫代乙酰胺(TAA)进行实验。成年大鼠可通过腹腔注射250~350mg/kg体重、皮下注射600mg/kg体重或灌胃300~400mg/kg体重的TAA进行复制。24小时后可以再次以相同的途径和剂量给药1次。实验过程中需要连续观察模型动物的一般状况,记录毒死亡时间。同时,可以进行颅骨电极包埋手术记录不同时点的脑电图,定时抽取血液进行肝、肾功能测定。在模型动物死亡或人为处死后,摘取其肝脏组织进行病理检查。需要注意的是,在整个实验过程中,模型动物的饮用水只能是10%葡萄糖生理盐水,每日需注射一定量的5%葡萄糖注射液2次。

(2)模型特点  肝衰竭动物模型在第二次TAA给药后8小时起就会出现尿黄、精神萎靡等症状。同时对外周刺激反应迟钝或进行性减弱,24小时时,则血清ALT、BT、TNF-a异常升高。虽然血清数值会逐渐回落,但在随后的72小时内,数值仍将维持在较高水平。此外,全血和血浆黏度增加,红细胞压积(HCT)提高,红细胞聚集指数(EAI)上升,血清AST、BUN、λ-谷氨酰转移酶(GGT)、脂蛋白-x(LP-x)、内毒素(ET)含量提高,红细胞刚性指数(IR)下降。病理检查可见,肝脏普遍充血肿大,颜色暗红,表面有粗糙颗粒。光镜下可发现,肝脏出现大片坏死,肝细胞出现水肿和气球样变,汇管区有炎症细胞浸润。以中央静脉为中心,肝小叶呈点状和灶状坏死。此时,模型动物翻正反射消失,体颤等共济失调表现明显。随着时间的推移,症状将会逐渐发展为嗜睡或昏迷状态,部分动物将会死亡,而死亡时间多发生在48小时内。将死动物的口唇、尾部、足部等处有出血和淤点。此外,模型动物脑电图显示典型的肝性脑病三相波(δ波)出现。

(3)比较医学  硫代乙酰胺(TAA)是一种肝毒性物质,在制作肝衰竭动物模型时具有很好的应用价值。复制的动物模型具有典型的肝实质细胞受损和肝功能衰竭的特征。其特征表现为:血清ALT、AST、ALP活性升高,肝细胞膜Na+-K+-ATP酶活性降低,血清TBIL、BUN、ET含量上升,血浆凝血因子水平下降,PT延长,全血和血浆黏度增加,血液和脑室内NH3、AAA和氨基丁酸等神经毒质浓度提高,脑电频率减慢,波幅增大,出现典型的三相波变化。除了直接损害肝实质细胞外,硫代乙酰胺还可使肝巨噬细胞功能降低、肠源性内毒素血症形成,后者进一步加重对肝组织的损害。有实验证明,TAA的剂量越大,内毒素和血氨水平越高,肝功能损害和肝脏病理变化越明显,肝性脑病分级评分越高,存在明显的量一效关系。如给大鼠腹腔注射TAA250mg/kg体重或350mg/kg体重,虽然两种剂量均能导致100%动物发生临床型肝性脑病,但前者分级多为1~2级,无动物死亡,而后者分级则多为3~4级,且动物死亡率达41.7%。TAA的使用方法简单,价格低廉。与D-GLA肝衰竭急性肝功能衰竭动物模型相比,TAA制作肝衰竭动物模型的特征更加明确,病程相对缓慢,分期易于掌握,近年来被广泛应用。但需要注意的是,肝衰竭动物模型一般多局限于小动物模型,其使用的范围有所限制。

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