急性肝缺血诱发肝衰竭动物模型

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(1)模型方法  将成年动物麻醉固定后,沿腹中线开腹,在肾静脉上方的下腔静脉上进行一荷包缝合。然后自小肠系膜根部找到门静脉后,将门静脉侧枝结扎切断,并静脉推注肝素100U/kg体重。接着,在脾静脉水平进行钳夹,并在门静脉肝门部分叉下方进行钳夹、剪断、结扎。将一内被抗凝剂的分流管向下插入门静脉直至脾静脉水平之上并结扎固定,再向上通过荷包插入下腔静脉,并收紧荷包缝合线。在插入下腔静脉前,需要使用无创伤血管钳阻断下腔静脉血流于荷包缝合的上、下方。随后,在肝十二指肠韧带中游离出胆总管,然后紧靠十二指肠双重结扎肝十二指肠韧带,阻断全部入肝动脉。或者,可以通过开腹后,游离门静脉和肝下腔静脉,进行门静脉和下腔静脉的端侧吻合或侧侧吻合,然后在此基础上,闭夹肝动脉。对于大鼠,可直接使用血管夹暂时性地夹闭肝动脉,而实验犬或猪则需在门腔静脉吻合后的24小时内进行二次手术,暂时性地夹闭肝动脉4至6小时。在整个模型制作和实验过程中,需要连续观察动物的血压、脉搏和神志情况,并记录其死亡时间。同时,进行动态抽取血液制备血清,以进行肝功能检测。摘取肝脏组织,进行形态学检查。

(2)模型特点  急性肝缺血模型是目前比较理想的诱发急性肝衰竭的动物模型,其手术步骤包括门腔静脉吻和及供肝动脉结扎两道程序。在入肝血流完全阻断后30至60分钟内,动物开始躁动不安,逐渐进入肝昏迷状态。收缩压随时间延长逐渐降低,75至155小时内全部死亡。死亡动物肝脏呈暗红色,无光泽,散布紫色斑块。从入肝血供阻断后开始,动物血清ALT、AST、LDH、NH3呈进行性升高,PT逐渐延长,而纤维蛋白原和GLU则逐步下降。在镜下观察,肝血流阻断后2小时内,狄氏间隙明显扩张,中央静脉塌陷。肝细胞浆内可见空泡样变性,而细胞核固缩,核仁消失。胞浆内糖原颗粒均质化,粗面内质网脱颗粒。线粒体水肿且部分溶解,细胞核染色质集聚,核变形,核内假包涵体形成。在肝衰竭动物中,肝小叶结构变得辨认不清。肝细胞排列紊乱,肝板离解,可见灶状和点片状肝细胞坏死。

(3)比较医学  当前,急性肝缺血模型是目前最佳的外科模型,用于研究肝衰竭以及进行生物人工肝支持实验与观察。这种模型具有可逆性,适合于较长时间的实验。急性肝缺血模型手术步骤包括彻底钳夹或结扎阻断术与暂时夹闭肝血管。前者指的是对门静脉和肝动脉行彻底钳夹或结扎阻断,属于完全性血供阻断模型,动物一般死亡时间短,故不可逆,适用于体外生物人工肝支持系统的短期评价。后者则采用钳夹或吊线牵拉的方式暂时性夹闭肝血管,随着急性肝缺血导致肝功能出现衰竭后再松解,恢复肝脏的血供,属于暂时性缺血性模型。其实际应用中,需要对吻合术与肝动脉结扎的时间间隔进行精确控制。由于吻合术与肝动脉结扎的时间间隔决定了侧支循环数出现的多与少,因此后者与动物急性肝衰竭发生的程度及死亡的时间具有明显的相关性。

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