高脂饲料加空气干燥术建立颈动脉粥样硬化动物模型
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1.造模材料 本实验采用体重2.0~2.5kg、4月龄的雄性日本大耳白兔作为造模材料,同时使用2%胆固醇的颗粒饲料、速眠新和庆大霉素药物。
2.造模方法 正常组喂普通颗粒兔饲料;模型组喂含2%胆固醇的颗粒饲料,1周后实施颈动脉内膜空气干燥术,术后继续高脂饲料喂养。所有动物均单笼喂饲,饮水不限,自由摄食,每天每只进食150g饲料。
内膜空气干燥术:术前12小时实验动物禁食,不禁水。在严格无菌条件下,实验动物经速眠新注射液肌肉麻醉,颈部在清洁消毒后,作颈正中切皮,于甲状软骨上方水平分离左侧颈总动脉,然后在两端以动脉夹阻断血流,针尽可能平行于血管纵轴方向穿刺进入阻断血管的两端,进行内皮干燥,并在生理盐水冲洗后,接上已调节好流量的气流,历时5分钟,最终在湿润棉片轻轻压迫穿刺点3~5分钟止血后进行解剖操作。术后,给实验动物肌内注射庆大霉素预防感染。
3.造模原理 利用高脂饲料加空气干燥术在较短的时间内诱发兔颈动脉粥样硬化。
4.造模后病理变化 肉眼大体观察:模型组颈动脉管壁明显增厚、僵硬并出现小侧支,随着时间的推移病变加重。镜下斑块发生率和重度狭窄比例对比:左侧87.5%的血管出现斑块,而右侧有54%的血管出现斑块,两者比较具有显著差异。同时发现左侧重度狭窄的比例为45%,而右侧重度狭窄的比例仅有8.3%,两者比较具有差异。光镜下HE染色观察:模型组颈动脉内皮细胞完整,肌层中的平滑肌细胞呈现出不规则排列,细胞质中出现了大量脂质沉积和斑块。
5.注意事项 在操作过程中,必须保证手术器械的严格消毒,防止手术感染,同时应尽可能减小手术创伤,执行严格无菌操作。
北检院部分仪器展示