一、实验目的

本实验旨在采用特定的方法制作帕金森病(PD)动物模型，并对其进行行为学评价，为PD发病机制的研究提供实验室支持。

二、实验原理

PD的发病机制与脑内黑质、纹状体系统中多巴胺(dopamine, DA)含量减少有关。6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)能破坏含DA的神经细胞，故注射6-OHDA到大鼠中脑可制作PD动物模型。本实验参照包新民所著《大鼠脑立体定位图谱》在脑立体定位仪下确定坐标，通过一侧纹状体前后两点注射6-OHDA，从而损伤黑质，导致DA能神经元损伤来制备大鼠PD模型，并对此模型进行行为学评价。

三、实验材料与方法

(一)实验材料

1. 所需设备：电热压力蒸汽灭菌器、微量电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、水平电泳仪、电热蒸馏水器、20μl、100μl、200μl、1000μl可调微量加样枪、手术器械(眼科剪、解剖剪、蚊式钳、有齿镊、无齿镊)等。

2. 实验动物及试剂：成年健康大鼠(昆明医科大学实验动物中心提供)，体重180～220g，7月龄，雌雄各半，经反复检测无异常旋转行为。化学试剂6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)。

(二)实验方法

1. 造模方法：大鼠术前禁食12h，实验组动物用3.6％水合氯醛(1.5ml/100g)腹腔注射，然后放到新的鼠笼中等待麻醉症状出现后再进行手术操作。麻醉成功后将大鼠腹位、四肢外展，用橡皮筋将其固定于立体定位仪上，呈俯卧位。将大鼠舌头轻轻拉向一边尽量保持呼吸通畅。

常规消毒，切开头皮和皮下组织，钝性分离颅骨外膜，充分暴露前囟及右侧颅骨。将齿棒设定为2.4mm，确定前囟坐标。根据包新民所著《大鼠脑立体定位图谱》，确定右侧纹状体两个注射点的坐标。在上述选定的坐标点用微型磨钻钻颅，用微量注射器将2μg/μl的6-OHDA(溶于0.2％抗坏血酸生理盐水中)5μl分别注入实验组动物的上述两点，注射速度为1μl/min，注毕留针10min，退针速度为1mm/min，以防药液溢出。退针后常规缝合头皮，术毕腹腔注射青霉素10万U/100g。对照组在上述右侧纹状体的两点注射入0.2％抗坏血酸生理盐水5μl。苏醒后两组动物均在同一环境下饲喂。

2. 旋转行为检测：分别在术后1周、2周、4周、6周、8周和10周于颈部皮下注射0.1％阿扑吗啡(apomorphine, APO; 1ml/kg)，诱发大鼠向健侧的单向旋转行为。PD模型旋转检测仪记录动物向对侧旋转情况，旋转360°为1次，每次记录30min。一般认为，平均旋转次数≥7转/min为成功的PD大鼠模型。

(三)实验结果

实验组大鼠有1只术后死亡，其余存活良好，未出现明确的手术并发症。术后1周可观察到偶发的旋转行为，但不超过3次/min。术后4周共7只大鼠恒定向健侧旋转，且旋转出现圈数达到成功PD模型标准。术后1～2周大鼠的旋转次数与4～6周相比具有显著性差异(P<0.05)。术后4周大鼠的旋转次数与6周相比无显著性差异。对照组术后一直未诱发出旋转行为，所有动物均存活良好，无一只死亡。

(四)结果分析

PD模型的制作关乎PD的实验研究成果。本实验通过采用特定的方法成功制作出PD动物模型，并对其进行

北检院部分仪器展示