阿尔茨海默病(Alzheimer disease ，AD)是一种神经退行性疾病，其病理过程的关键问题是患者脑中淀粉样多肽的异常增加和沉积。因此，寻找有效的治疗方法对于缓解患者痛苦至关重要。

中性内肤酶(NEP)是脑内最重要的淀粉样多肽降解酶，是影响脑内淀粉样多肽分解代谢速率的限制因素。神经干细胞(neural stem cell ， NSC)是具有向多种细胞系分化又具有自我更新能力的细胞。NSC可以修复和替代受损的神经细胞，同时也是非常理想的基因载体，拥有许多其他载体所没有的优点。

本实验旨在将NEP基因转染到神经干细胞中，将转染后的神经干细胞移植到AD大鼠侧脑室，以观察其对AD大鼠行为学的影响，为阿尔茨海默病的治疗提供新的依据。

1. 材料和方法

1.1 实验动物

使用清洁的SD大鼠作为实验动物，由佳木斯大学动物实验中心提供。

1.2 主要试剂

本实验所用试剂包括胎牛血清、Ap1-40、神经干细胞基础培养基、神经干细胞完全培养基、神经小球分散试剂盒等，均从美国Sigma公司购买。

1.3 方法

1.3.1 动物模型的建立

首先，根据Pellegrino和Cusmhna的大鼠脑立体定位图谱，选取左侧海马CA1区作为注射区。然后，采用微量加样器缓慢注射Ap1-40溶液1 µL，之后缓慢撤针，充分消毒，缝合皮肤。术后常规饲养，待两周后做细胞移植。

1.3.2 分组和细胞移植

30只AD大鼠随机分为三组，每组各10只:AD模型组、移植神经干细胞组(NSCs组)和移植NEP基因转染神经干细胞组(NEP-NSCs组)。选左侧海马CA1区，在三组AD大鼠分别微量植入6 µL细胞培养液、NSC悬液及NEP-NSC悬液(浓度约为1 × 105个细胞/mL)，注射完毕后，全层缝合头皮，腹腔注射青霉素，术后放置于温暖安静处至清醒。每组大鼠术后第8周进行实验。

1.3.3 隐蔽平台实验

实验期限为6天。实验前，让大鼠自由游泳1分钟。在水迷宫象限的中央固定隐蔽平台的位置，将每只大鼠头朝外壁在任何一个象限内的随机位置放入水中，大鼠爬到平台上或到达60秒时，实验立即停止。大鼠自己爬到平台或操作人员引导使其爬上平台后停留10秒。每天训练4次，每次间隔30分钟。通过影像系统记录大鼠寻找并爬上平台所需时间即逃避潜伏期。此实验用于

北检院部分仪器展示