使用混合了牛S抗原和完全弗氏佐剂的乳剂免疫大鼠，使其免疫14天后，在眼球玻璃体腔内接种牛S抗原，成功复制了大鼠抗原诱导性葡萄膜视网膜炎模型。

1. 模型制作方法

使用体重为140-180克、雌性的Wistar大鼠。

(1) S抗原的提纯：新鲜的牛视网膜冰浴下研磨成匀浆。离心（12000rpm，60min），取上清液后，加入饱和的硫酸铵，放入4℃过夜透析。再离心（4000rpm，30min），弃掉上清液并加入去离子水溶解沉淀，然后将其移至透析袋中，在0.15mol/L的氯化钠溶液中透析24小时（共换液3次），之后放入2.5mmol/L的二羟基氨基甲烷盐酸盐溶液（Tris.HCl）中透析24小时（共换液3次）。透析后的样品再次离心（12000rpm，4℃，60min），取上清液用于层析。使用DEAE2 Sepharose FF凝胶，XK26柱（2.6cm×16cm），每批用50毫升凝胶充填40个视网膜。常规层析缓冲液为3个柱体积（20mmol/L Tris.HCl，0.01％叠氮钠，pH7.5），加样后先用3-5个柱体积的缓冲液进行洗脱，流速为4-7毫升/分钟，直到杂纯部分回落到基线以下。之后使用0-0.4mol/L的氯化钠线性洗脱，流速为2毫升/分钟，共用了8个柱体积进行洗脱。使用高盐、碱和乙醇对柱体进行再生、清洗和消毒。

(2) 将S抗原（1mg/mL）和完全弗氏佐剂混合成乳剂，取0.2毫升皮下注射于大鼠後足底部，使之致敏。14天后，将10微克的牛S抗原接种于实验鼠右眼玻璃体腔，建立抗原诱导性葡萄膜视网膜炎（AIU）模型。抗原注射于玻璃体腔的方法是，使用氯胺酮加氯丙嗪混合液（各含25-50mg/kg，肌肉内注射）麻醉大鼠，然後用托吡卡胺扩瞳和1%的丁卡因表面麻醉，穿刺前房后，在睫状体平坦部位使用微量进样器插入含有10微克牛S抗原的PBS溶液10微升的玻璃体腔中。

2. 观察指标与分析

(1) 症状：模型组大鼠于玻璃体腔注射后1天，即出现以眼后节段为主的严重葡萄膜炎表现。

(2) 病理学检查：在光镜下观察可见，葡萄膜视网膜炎急性期（玻璃体腔注射后1-5天取材）出现了全葡萄膜炎的病理变化，主要表现为前房炎症细胞渗出，玻璃体腔中有大量炎症细胞和蛋白质渗出物，葡萄膜和视网膜增厚，并有炎症细胞浸润，重者还会导致感光细胞的破坏。在晚期（玻璃体腔注射10天后取材）可见视网膜局限性炎性反应。

(3) 血清抗体效价测定：通过双向免疫扩散法测出S抗原和抗血清之间出现清晰的反应带，血清抗体滴度为1：8-1：16。

特点：利用牛黑色素诱导的大鼠葡萄膜炎（EMIU）与人类急性前部葡萄膜炎（AAu）有着很大的相似之处，二者的病程持续时间相似，分别为6周和1个月，眼部症状相似，如虹膜血管充血扩张、前房纤维渗出和白细胞渗出、虹膜粘连等。不同之处在于，EMIU通常导致双眼炎症，而AAU通常只在年轻男性发生，而且EMIU通常在各年龄段的不同性别的大鼠都可以发生。因此，EMIU是研究人类葡萄膜炎的很好的动物模型。

北检院部分仪器展示