【操作步骤】SARS冠状病毒的PUMC01株最初分离自中国一位SARS病人，经过多次传代，在Vero细胞上培养，并通过RT-PCR、全基因测序和电镜形态观察等方法，确定其为SARS冠状病毒，病毒TCID50为10的6次方/ml。动物试验采用1至3岁的恒河猴，经过SPF级别的复检后，进行鼻腔接种100000 TCID50(1ml体积)病毒，所有实验均在SARS专用ABSL-3实验室中完成。为观察动物的过程和结果，实验人员每日检测其体温、进行血液常规检查、观察动物有无呼吸困难、皮疹、摄食减少等临床表现。在病毒接种后的第1天起，每天收集咽拭子标本，经过培养和病毒分离后，进行病毒RNA检测和血清抗体检测等。而在恒河猴安乐死后，还进行了病理学研究，对其肺、心、肝、脾、肾、脑、肠、胃以及淋巴结等组织进行了详细的观察和分析。

【结果分析】

(1)所有实验猴在实验前1周测量体温和外周血常规，均正常。病毒接种后，实验人员每日检测其体温、血液常规和白细胞计数，观察到恒河猴在病毒接种后的2至5天内，体温会出现一过性的升高，为39至40℃，但随后恢复到正常38.5℃左右。白细胞计数在感染1周时偏低，处于正常范围下限E(4～10)×10的9次方个/升]之内，部分动物有呼吸困难、摄食减少和胸腹部皮肤出现皮疹等临床表现。但未观察到咳嗽、流涕、呕吐、腹泻等表现。肺部的X光检查也未出现明显改变。

(2)从恒河猴接种5天后的咽拭子标本中经过Vero细胞培养，病毒萃取后进行病毒分离培养，观察到产生了典型细胞病变(CPE)，大小为797bp的目的条带检测阳性可持续到第15天。

(3)病毒接种前恒河猴的SARS冠状病毒特异性抗体IgG及中和抗体均为阴性，而在感染猴的11至15天之间，SARS冠状病毒特异性抗体IgG和中和抗体均出现阳性。

(4)在大体肺组织表面有局部轻度实变现象，而肝、肾、脾及淋巴结等组织未出现病变。

(5)通过对感染5、10、15、20、30和60天后安乐死的恒河猴进行病理学检查，可见到彩图13.1至13.7所示的病理变化。

根据Koch理论要求，确定一种病毒性疾病须满足6个指标，即从患者体内分离到病毒、能经宿主细胞培养、可滤过性的证明、在原宿主或相关宿主体内可复制相似疾病、重复分离病毒以及检测到体内

北检院部分仪器展示