视网膜母细胞瘤动物模型

肿瘤异种移植是肿瘤学领域极为重要的一个研究手段。然而,简单地将人类肿瘤移植到其他动物身上不可能成功。为了提高造模的成功率,研究者们开发出了各种方法来辅助移植过程。

最早的方法是给实验动物接受放射线照射、胸腺摘除或者给予抗T细胞抗体等处理。但由于抑制作用有限,这些方法并没有取得太多成功。后来,裸鼠成为了研究的理想动物,因为它们基本上没有免疫系统,能够接受异种移植。现在,已经发现可以在裸鼠体内生长多种人类肿瘤,如黑素瘤、恶性胶质瘤以及结肠、胰腺、肺、乳腺、肾、前列腺、宫颈等肿瘤。

然而,造模成功率并不高,移植成瘤后的自行消退是造模失败的主要原因。对于RB(视网膜母细胞瘤)来说,由于它起源于光感受器前体细胞,生长于视网膜内,所以其裸鼠异位移植存在多种部位。

目前,常用的造模方法有以下几种:

1.皮下移植:以SO-RB50细胞为例。将SO-RB50细胞悬液0.2ml接种在NOD/SCID小鼠左侧腹股沟皮下,细胞密度为1×107个。12~19天开始成瘤,成瘤率90%;20天后移植瘤呈现快速生长。SO-RB50注射到BALB/c裸鼠颈背部皮下的成瘤率仅为1/7,成瘤潜伏期为4周。

2.前房或玻璃体内移植:全麻后用复方托吡卡胺滴眼液散瞳,用微量注射器吸取5μl密度为10000000个/ml RB细胞悬液,自角巩膜缘部位注射入裸鼠的前房或玻璃体。注射细胞密度为4×108个/ml,造模前3天开始给予含环孢菌素A滴眼液,4次/天。前房内肿瘤可以存在30天以上,但难以确保持续存在。对实验有诸多限制。

3.视网膜下异位移植:吸取RB细胞悬液10μl,细胞密度5.0×106个/ml。散瞳、麻醉BALB/c裸鼠后显微镜下角膜缘内穿刺进入前房,钝性微量注射针经该穿刺道进入前房,穿过晶状体悬韧带(注意勿伤及晶状体),将晶状体拨挤到一侧。微量注射针到达视网膜下后,在微量泵控制器控制下注射0.5μl细胞悬液于视网膜下。

造模方法的不同所造成的成瘤率、成瘤时间、成瘤数量、生长状况等均不相同。

裸鼠皮下接种RB的动物模型,成瘤率低、成瘤潜伏期长,而注射到前房或玻璃体内更易成瘤,也可显示肿瘤生长对眼球的破坏以及对眼球的局部浸润。但其本质更接近于RB细胞的玻璃体腔培养,与RB真实的发生发展还存在一定差异。视网膜下注射无疑最为接近肿瘤生长的自然过程,但操作困难需一定的设备和技术。

对于肿瘤异种移植的评估和应用,需要注意模型的局限性。例如,裸鼠皮下接种RB的模型不易见到肿瘤远处转移;前房或玻璃体内注射的模型特点是肿瘤易于生长,但无法评估眼内微环境对肿瘤生长的影响;视网膜下注射模型最为接近肿瘤生长的自然过程,但操作困难,且肿瘤生长的过程和人类疾病可能存在一定的差异。

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