微量注射法建立外伤后癫痫动物模型

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1.造模材料

本次实验动物为Wistar大鼠,性别为雄性,体重在200到250克之间。所需要的药物为异戊巴比妥和FeCl3溶液。操作器械包括大鼠立体定位仪、无线蓝牙脑电监测系统、高速牙钻、牙托粉和微量注射器。

2.造模方法

首先,对大鼠进行称重操作。然后使用50毫克/千克的2%异戊巴比妥溶液进行腹腔注射麻醉,将大鼠固定在立体定位仪上。接着,剪去头顶的毛,消毒头顶皮肤,沿头顶正中线切开头皮,切口长约3厘米。剥离头皮筋膜,暴露颅骨。在左侧颅骨冠状缝后3毫米、矢状缝旁2毫米处使用高速牙钻钻一个直径为2毫米的孔。然后再在另外5个位置钻孔,按照D'Ambrosio的方法进行定位,采用以前囟点为原心,矢状缝为Y轴,过原点垂直于Y轴的直线为X轴,并且坐标轴单位是毫米。五个孔的坐标分别为(4,0)、(4,-6)、(-4,0)、(-4,-6)和额骨正中。使用微量注射器将浓度为100毫克/升、pH为1.5的FeCl3溶液缓慢注射入大鼠的感觉运动皮质区内,进针深度为3毫米。注射完毕后,为防止液体溢出,需剩余针头在感觉运动皮质区内5分钟。

进行脑电记录时,需要将前端钝圆的纯银丝放置在上述已钻好的电极孔的硬脑膜外,并使用牙托粉将银丝与颅骨固定牢固。然后,将银丝的另一端连接到无线蓝牙脑电监测系统上,从而对大鼠的脑电图进行监测。

3.造模原理

本实验中使用FeCl3溶液可以引发大鼠的癫痫症状。

4.造模后的变化

实验进行后的2.5小时左右,大鼠开始出现癫痫发作。发作形式表现为头向右偏,身体以尾根为圆心顺时针方向旋转,持续时间约为0.5到1分钟。接近3小时时,大鼠开始出现典型的癫痫大发作。发作形式表现为身体向右后扭转,上半身抬起,接着整个身体背曲强直,四肢剧烈抽搐,翻转跳起。跳起时离地高度约为20到30厘米,同时可见大鼠双眼眼裂变大,眼球向外凸出,并伴随出现尿失禁现象。癫痫发作持续时间约1分钟。发作完毕后,大鼠侧卧在地,整个身体静止不动,出现瘫软现象,约5到10分钟后大鼠恢复正常活动。模型建立后3到5小时期间,约每10到20分钟发作1次。模型建立后6到8小时期间,大鼠发作频率逐渐下降,约每0.5到1小时发作1次。在癫痫大发作的间歇期,大鼠出现了交替咀嚼自动症。模型建立后24小时到1周之内,大鼠癫痫发作频率有所减少,约每天发作1次,主要表现为咀嚼自动症和身体不自主的抽动。模型建立后第二周内,大鼠的癫痫发作频率进一步下降,约每2到5天发作1次。

模型建立后3小时,首次出现频率明显加快、波幅明显高出背景波的棘波放电。癫痫波起源于左侧注射部位的感觉运动皮质区,注射侧及对侧的感觉运动皮质区显示出明显的癫痫波。同时,大鼠出现身体背曲强直和四肢抽搐。术后5天和术后15天时,脑电图上出现的癫痫波主要为棘慢波和尖慢波。发作间期可见散在出现的尖波及尖慢波活动。

5.注意事项

在实验中,选择体重在200到250克范围内的大鼠。这类型大鼠具备较强的耐受力,头部易于被脑立体定位仪固定。注药的速度和留针时间也非常关键。手术器械必须进行严格的消毒,以防手术感染。手术创伤应该尽可能小,确保无菌操作。在颅骨钻洞时,要注意深浅,一旦突破感立即停止,防止引起大量出血。

术后,需要将大鼠分开饲养,等待它们苏醒后3到5小时后,才能合笼饲养。这样可以防止先醒的大鼠舔咬昏迷大鼠的伤口。饲养室内应尽可能保持合适的温度和湿度,以保证大鼠的健康。

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