丙型肝炎病毒(HCV)转基因动物模型

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(1)复制方法  目前,科学家们采用了雄原核显微注射法来制备转基因小鼠。研究人员利用此方法制造了许多转部分HCV基因的小鼠。具体操作是:将包含HCV 5' UTR与结构基因(C1+E1+E2)的片段从pHCS质粒中经过酶切,然后通过中间载体pMT再次进行酶切,最后在pcDNA3的BamHI EcoRI位点插入这一片段(位于CMV启动子下),通过显微注射法将待转基因注入小鼠受精卵雄前核中,注入量为1~2pl/卵。待其发育成熟后,植入到6周龄假孕母鼠输卵管中,并等待其产下小鼠。

(2)模型特点 研究人员发现,在表达HCV非结构蛋白Ns5A的小鼠中,未观察到肝组织病变和直接的细胞致病性。而在表达HCV核心蛋白的转基因小鼠中,则引发了肝脏脂肪变化和肝细胞癌变,这也是许多慢性HCV感染患者所出现的现象。在转HCV核心蛋白基因的小鼠中,还发现由于活性氧种类的增加而引发的脂类过氧化和线粒体DNA损伤的现象,这也造成了肝细胞癌变的出现。此外,在一个转结构基因(Core/E1/E2/P7)和一个转完整HCV ORF的小鼠品系中,也观察到了肝脏脂肪变和肝细胞癌变的现象。

(3)比较医学 丙型肝炎病毒(HCV)是输血后引起肝炎的主要病原体。HCV感染后除可导致急慢性肝炎外,还可能引起肝硬化与肝癌等疾病。由于缺乏合适的组织培养系统及广为应用的动物模型,无法直接研究HCV与肝细胞的相互作用。因此,HCV的发病机制尚未完全弄清,可能是通过病毒直接侵袭或宿主对HCV的免疫防御机制而导致肝脏的病理变化。目前,转基因小鼠系统被广泛应用于研究基因表达调控的效应。HCV结构基因小鼠模型的建立,为HCV全基因转基因小鼠模型的建立提供了重要技术保证,有助于深入研究HCV的感染与治疗的机理。


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