6-羟基多巴胺致帕金森病大鼠模型

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1.造模材料  动物:SD大鼠,雌性,2~3月龄,体重180~220g;药物:6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA),阿扑吗啡,兔抗酪氨酸羟化酶血清,亲和素生物素一过氧化酶复台物(avidin-biotin-peroxidase complex, ABC)试剂盒;器械:大鼠脑立体定向仪,307-4型台式牙钻车,JEM100-SX电镜。

2.造模方法  将实验动物随机分为实验组和对照组,经反复行为检测确认其无旋转行为后进行实验:

(1)实验组:腹腔注射1%戊巴比妥(30mg/kg体重)将大鼠麻醉后,严格颅平位(前囟与后囟水平高度相差0.1mm以下,颅骨矢状缝两侧旁开4mm处水平高度相差0.1mm以下)固定于大鼠脑立体定向仪上(注意将微量注射器针柄与操作平面保持垂直),常规消毒后,剪开头皮,剥离骨膜,参照大鼠脑立体定向图谱,确定左侧黑质致密部(substanfia nigra compacta, SNC)和黑质纹状体通路(nigrostriatal pathway)两坐标[①SNC前囟后(5.0±0.2)mm,矢状缝左侧(1.7±0.1)mm,颅骨表面下(7.6±0.1)mm;②VTA前囟后(4.6±0.1)mm,矢状缝左侧(0.9±0.1)mm,颅骨表面下(7.5±0.1)mm],可根据大鼠体重和头颅大小在规定范围内确定具体坐标并用三棱针标记,用牙科钻小心钻透颅骨(注意勿损伤硬脑膜),按确定坐标将微量注射器缓慢进针到预定深度,向两点各注射6-OHDA 8μg(溶于4μl含质量分数为0.2%抗坏血酸的生理盐水中,用前临时配制),注射深度应以针孔斜面中点为参照点(以颅骨下硬脑膜处作为0坐标),由于存在个体差异,具体深度可视大鼠体重和头颅大小略微变动,并可在一定范围内边上移边注射(范围以不超过0.3mm为宜),以保证6-OHDA能准确注入预定部位,注射速度为10d/min,留针10min,缓慢退针(2~3min),术后用牙科胶覆盖钻孔,常规缝合伤口,连续腹腔注

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