仓鼠莱姆病感染动物模型

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1.造模方法:首先,伯氏疏螺旋体应从感染患者的脑脊液中提取出来,然后将其培养在含BSK的培养基中,生长周期需要保持在5天左右,培养温度应控制在35℃。在悬浮液中加入新鲜的BSK,以使螺旋体的浓度保持在5×1000 000/ml。可以选择叙利亚仓鼠进行造模实验,它们的体重应在80~100g之间,将含有5×1000 000/ml的伯氏疏螺旋体悬浮液进行10000转/分离,去除上层杂质。造模可以通过静脉注射或注入后脚掌皮下的方法进行,注入量为0.2~0.4ml上述螺旋体悬液。14天后,可以在6个器官中检测到螺旋体的存在。感染3周后,动物模型出现后爪部的肿胀、跛行现象,随着病程进展加重出现严重的关节炎症状。

2.模型检测方法:

(1) 血清学检测:我们可以采用酶联免疫吸附试剂检测仓鼠感染模型中抗伯氏疏螺旋体抗体的效价。从仓鼠体内提取的血清需要进行1:20稀释,使用兔抗仓鼠的免疫球蛋白G的抗体来进行检测。简单来说,将含有伯氏疏螺旋体的血清100μl加入到孔板中,进行15min的孵育。孵育后,用碱性磷酸酶冲洗,加入稀释的兔抗仓鼠的免疫球蛋白G。3周感染螺旋体的模型开始出现血液中抗体滴度的增加,到5周时抗体效价达到高峰。

(2) 组织病理学检测:感染1周或3周的模型可采用吸入二氧化碳的方式使其安乐死,将心肌、肾、脑组织、皮肤、关节、肌组织等放入含有10%福尔马林溶液中固定,脱水、石蜡包埋、切片、苏木素伊红染色,用暗视野显微镜法检查伯氏疏螺旋体。镜下可以发现,感染后模型动物心脏、关节等组织周围存在中性粒细胞、单核细胞等炎症细胞浸润现象。关节滑膜也会出现增厚情况。

(3) 病原分离培养:取感染后3周的仓鼠模型注射部位皮肤组织小块、脑脊液及内脏组织等接种于BSKⅡ培养基,温度保持在33℃。5~7天后,使用暗视野显微镜下检查,如果发现阳性培养物,进行传代后以便进一步鉴定证实。

(4) PCR方法检测:感染3周后,可以从动物注射部位取皮肤组织或非注射部位组织,处理后用PCR方法检测伯氏螺旋体的DNA是否存在。

3.模型特点:仓鼠对肩突硬蜱的感染率可达55%~75%,动物感染莱姆病后可易出现后胫、趾关节滑膜肥大,并伴有局部溃疡和覆盖黏着性纤维蛋白。镜下可以发现,关节滑膜、肌腱组织中容易出现大量中性粒细胞、淋巴细胞和微血管扩张等炎症表现。因此,仓鼠莱姆病感染模型多应用于莱姆病的实验传播研究,媒介效能和宿主潜能的分析研究。

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