三硝酸苯磺酸诱发急、慢性溃疡性结肠炎动物模型

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(1)改写方法  对于成年雌性BALB/c小鼠,实验前需要进行24小时禁食不禁水,并经过轻微麻醉,使用套有小型导尿管的1毫升注射器抽取含有2毫克三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonicacid,TNBS)的50%乙醇溶液。接下来,将导尿管缓慢插入肛门约3.5厘米位置,并缓慢将药液注入结肠。注入药液后,停留20秒后缓慢拔出导尿管,将小鼠倒置约30秒后放回笼中。重复以上步骤进行连续7天,第8天将其处死,并分离结肠,通过开腹操作,剪裁结肠的外侧,然后用生理盐水清洗肛门至回盲部结肠,观察肠壁黏膜,并取出结肠标本供病理组织学检查。使用禁食不禁水24小时的成年雌性SD大鼠,在麻醉后,将直径为2毫米、长约15厘米的橡胶输液管轻轻从肛门插入8厘米,并用注射器缓慢注入含有30毫克TNBS的50%乙醇溶液0.85毫升。待大鼠自身清醒后自由进食,每天观察大鼠的神态、活动、食欲、体重和大便性状等情况。在灌肠后8周内,分别于不同的位置(如距肛门1厘米、3厘米和8厘米,以及横结肠、升结肠和患处位置)取1块组织标本(2毫米×10毫米),进行组织形态学检查,另外取出远端结肠组织供中性粒细胞髓过氧化物酶(MP0)活性测定。通过对大鼠结肠黏膜进行观察,对大体形态表现(如粘连、溃疡形成及炎症)和组织学损伤(如溃疡、炎症、肉芽肿、病变深度、纤维化)进行评分。评分标准:①粘连:无:0分;轻度(结肠与其他组织剥离较易):1分,重度:2分。②溃疡形成及炎症:无:0分;局部充血但无溃疡:1分;1处溃疡不伴充血或肠壁增厚:2分;1处溃疡伴炎症:3分;>2处溃疡伴炎症:4分;>2处溃疡和/或炎症>1厘米:5分;溃疡和/或炎症>2厘米,病变范围每增加1厘米,分值加1。③组织学损伤:溃疡:无:0分;<3毫米:1分;>3毫米:2分。炎症:无:0分;轻度:1分;重度:2分;肉芽肿:无:0分;有:1分;病变深度:无:0分;黏膜下层:1分;肌层:2分;浆膜层:3分;纤维化:无:0分;轻度:1分;重度:2分。MP0活性的测定采用远端结肠组织,每200毫克加入1毫升0.2%十六烷基三甲基溴化铵,并通过匀浆、冻溶3次、离心(10分钟,2000r/min)等步骤,取上清液0

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