三硝酸苯磺酸诱发急、慢性溃疡性结肠炎动物模型

(1)改写方法  对于成年雌性BALB/c小鼠，实验前需要进行24小时禁食不禁水，并经过轻微麻醉，使用套有小型导尿管的1毫升注射器抽取含有2毫克三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonicacid，TNBS)的50%乙醇溶液。接下来，将导尿管缓慢插入肛门约3.5厘米位置，并缓慢将药液注入结肠。注入药液后，停留20秒后缓慢拔出导尿管，将小鼠倒置约30秒后放回笼中。重复以上步骤进行连续7天，第8天将其处死，并分离结肠，通过开腹操作，剪裁结肠的外侧，然后用生理盐水清洗肛门至回盲部结肠，观察肠壁黏膜，并取出结肠标本供病理组织学检查。使用禁食不禁水24小时的成年雌性SD大鼠，在麻醉后，将直径为2毫米、长约15厘米的橡胶输液管轻轻从肛门插入8厘米，并用注射器缓慢注入含有30毫克TNBS的50%乙醇溶液0.85毫升。待大鼠自身清醒后自由进食，每天观察大鼠的神态、活动、食欲、体重和大便性状等情况。在灌肠后8周内，分别于不同的位置（如距肛门1厘米、3厘米和8厘米，以及横结肠、升结肠和患处位置）取1块组织标本(2毫米×10毫米)，进行组织形态学检查，另外取出远端结肠组织供中性粒细胞髓过氧化物酶(MP0)活性测定。通过对大鼠结肠黏膜进行观察，对大体形态表现(如粘连、溃疡形成及炎症)和组织学损伤(如溃疡、炎症、肉芽肿、病变深度、纤维化)进行评分。评分标准：①粘连：无：0分；轻度(结肠与其他组织剥离较易)：1分，重度：2分。②溃疡形成及炎症：无：0分；局部充血但无溃疡：1分；1处溃疡不伴充血或肠壁增厚：2分；1处溃疡伴炎症：3分；>2处溃疡伴炎症：4分；>2处溃疡和/或炎症>1厘米：5分；溃疡和/或炎症>2厘米，病变范围每增加1厘米，分值加1。③组织学损伤：溃疡：无：0分；<3毫米：1分；>3毫米：2分。炎症：无：0分；轻度：1分；重度：2分；肉芽肿：无：0分；有：1分；病变深度：无：0分；黏膜下层：1分；肌层：2分；浆膜层：3分；纤维化：无：0分；轻度：1分；重度：2分。MP0活性的测定采用远端结肠组织，每200毫克加入1毫升0.2%十六烷基三甲基溴化铵，并通过匀浆、冻溶3次、离心(10分钟，2000r/min)等步骤，取上清液0