【摘要】本文旨在建立一种小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法，并进行初步应用。研究人员根据NCBI发表的TMEV GD VII株(GI:62039)基因组序列设计特异引物，建立了RT-PCR方法，并对方法的敏感性和特异性进行验证。实验使用脑腔接种方式感染9只BALB/c小鼠，感染后第6天检测其脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本，同时检测100份小鼠盲肠内容物样本对该方法进行初步应用。

结果显示，以GD VII RNA为模板，建立的RT-PCR方法能够扩增约371bp的单一目的条带，敏感性验证显示能够检测到的最低GD VII c DNA量为0.69pg/μL。在方法特异性验证中，以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照，建立的方法均未出现目的条带。

在脑腔接种感染小鼠方面，所有小鼠在接种第3天均产生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等症状。其中2只小鼠于第5天死亡。采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测，结果显示，所有小鼠的脑组织均检测到GD VII RNA，而其他组织均未检测到。对100份小鼠盲肠内容物进行检测，结果均为阴性。

综上所述，该研究成功建立了TMEV GDVII株RT-PCR方法，可高效地检测小鼠组织中的病毒感染。该方法的特异性好、灵敏度高，定量准确，可以作为实验动物国家标准的有效补充，为小鼠疾病的研究提供了有力支持。

北检院部分仪器展示