大鼠不同程度脑损伤模型

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(1)改进方法  本实验采用健康雄性大鼠,体重在230至260克之间。使用改进的Feeney自由落体硬膜外撞击方法,该方法包含底板、固定支架、垂直导杆、下落击锤和聚乙烯撞击圆锥五个部分。撞击圆锥头端直径为4mm、高为2.5mm。实验动物首先在腹腔注射水合氯醛或戊巴比妥钠以麻醉。手术开始时,将动物的头部固定在立体定向仪上,切除头部顶部毛发,消毒手术区域皮肤。然后,从头皮的中线左侧切开并分离骨膜,使用牙科钻在中线旁边2mm的距离和紧挨冠状缝后开一个直径为5mm的圆形窗,保持硬膜的完整性。使用20g砝码分别在10cm和30cm高处落下,撞击在硬膜上的圆锥上,造成轻、中型损伤;使用40g砝码在25cm高处落下,造成重型损伤。轻、中、重三种损伤的致伤冲击力分别为200g•cm、600g•cm和1000g•cm。操作完成后,使用锌汀粉封闭骨窗,缝合头皮,并将实验动物置于鼠笼中喂养。

(2)检测指标

1)脑含水量测定  将动物处死后,在30秒内取出大脑,用滤纸吸干脑表面的血液,取100mg左侧顶叶皮质,用电子分析天平称量湿重,然后将其置于110℃的恒温干燥箱内烤干(24小时),再次称量干重。根据以下Elliot方程计算各部位的脑含水量百分比:

脑含水量(%)=[(湿重-干重)/湿重]×100%

2)血脑屏障定量测定  实验动物在损伤前1小时注射含有2%伊文斯蓝(3ml/kg体重)的溶液。在取出脑组织前,为清除血液中的染料,可以通过左心室灌注的方式,将生理盐水注入右心室,直至右心室中的液体流出为止。将损伤侧皮质称重,加入二倍体积的二甲基甲酰胺,置于50℃水浴中孵育72小时,离心1500g,离心10分钟,取上清液。使用分光光度计在伊文斯蓝最大吸收光谱635mm处检测吸光度,根据标准曲线查得伊文斯蓝含量,并以μg/g脑组织表示结果。

3)病理学观察  实验动物在损伤后24小时再次麻醉,快速灌注150ml生理盐水,然后快速灌注冰冷的4%多聚甲醛200ml,在2小时内慢速灌注剩余的300ml。将脑组织浸入4%多聚甲醛内,将其固定48小时,然后进行一般性的乙醇脱水、石蜡包埋和5μm的冠状切片制备,进行HE染色和尼氏小体染色,并在光镜下观

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